int(0)

Teste de laborator

Pachete de analize medicale

Planșa anatomică

Teste de la A la Z A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z
Teste Laborator
Product categories
Pachete analize Plansa anatomica
< inapoi la lista

Polipoza adenomatoasă familială-mutații APC

Pret 57770.00 MDL

Семейный аденоматозный полипоз (ФАП), хотя и является редким заболеванием, является наиболее распространенным синдромом аденоматозного полипоза. Он имеет аутосомно-доминантную передачу и характеризуется ранним появлением сотен или даже тысяч аденоматозных полипов, распространенных по всей толстой кишке и прямой кишке. В отсутствие лечения PAF оно неизменно прогрессирует до рака толстой кишки в возрасте 35-40 лет. Кроме того, существует повышенный риск других злокачественных новообразований.
Частота возникновения PAF во всем мире постоянна и колеблется от 1: 6000 до 1: 12000 рождений, причем оба пола одинаково вовлечены.
Генетический дефект в PAF представлен мутацией зародышевой линии в гене APC (adenomatosis polyposis coli), гене-супрессоре опухоли, расположенном на длинном плече хромосомы 5, полоса q21. Он состоит из 15 экзонов и кодирует белок с высокой молекулярной массой (309 кДа). Белок АРС имеет несколько доменов, которые обеспечивают олигомеризацию, а также взаимодействие с различными внутриклеточными белками, которые играют важную роль в адгезии клеток, трансдукции сигнала и активации транскрипции. Исследования, проведенные как in vitro, так и на животных моделях (использованных на мышах), показали, что APC также участвует в выравнивании хромосом в метафазе, миграции клеток и стимуляции апоптоза в клетках толстой кишки.
APC является классическим белком-супрессором опухолей, который играет центральную роль в пути передачи сигналов Wnt, частично регулируя деградацию β-катенина. Сигналы, передаваемые путем Wnt, влияют на стабильность белкового комплекса, который содержит β-катенин, кондуктин и GSK3 (гликоген-синтетаз-киназу). В отсутствие Wnt или в присутствии белка APC дикого типа β-катенин разлагается в протеасоме с помощью убиквитин-опосредованного процесса. При наличии Wnt или отсутствии APC (как при большинстве форм рака толстой кишки) экспрессируются гены-мишени β-катенина, включая c-MYC. Экспрессия гена MYC увеличивает экспрессию полиамин-орнитин-декарбоксилазы (ODC), которая является протоонкогеном. Таким образом, продукт гена АРС косвенно регулирует транскрипцию ряда критических генов, вовлеченных в пролиферацию клеток, посредством взаимодействия с фактором транскрипции β-катенина.
Более 300 различных типов мутаций сегодня признаны причиной семейного аденоматозного полипоза. Они представлены небольшими делециями – 46%; небольшие вставки – 10% и бессмысленные мутации – 28%. Также сообщалось о больших изменениях генов (13%), причем последние данные свидетельствуют о том, что они могут быть причиной до 20% случаев PAF1.
Наиболее распространенной мутацией, которая встречается примерно у 10% пациентов с PAF, является делеция в кодоне 1309, а следующей по частоте (которая встречается у 5% пациентов) также является делеция, но в кодоне 1061. Более 60% мутаций АРС находятся в центральной области, называемой MCR («область кластеров мутаций»), расположенной между кодонами 1284 и 1580; эта область ответственна за деградацию β-катенина.
Анализ мутаций гена APC показывает, что большинство генетических аномалий приводит к синтезу усеченного или дисфункционального белка. Потеря функции APC ингибирует апоптоз и позволяет -катенину накапливаться внутриклеточно, что стимулирует рост клеток с последующим развитием аденом.
Есть корреляции между определенными мутациями и клиническими проявлениями заболевания, но, тем не менее, корреляция не является точной, и могут возникнуть различия.
Генетические аномалии, которые вызывают классическую форму заболевания, обнаруживаются между экзоном 5 и 5′-частью экзона 15, в то время как те, которые связаны с ослабленной формой, имеют тенденцию кластеризоваться в крайней 5′-области гена и 3′-части экзона 15 (проксимально кодоном 1517 или дистальным к 1900 г.). Мутации в области кодона 1250 – 1464 связаны с тяжелым полипозом. У пациентов с мутациями между кодонами 1445 – 1578 могут развиться тяжелые десмоидальные опухоли1; 2; 4.
Различные мутации в гене APC определяют широкий спектр синдромов, известных как полипоз, ассоциированный с APC, которые включают:
1. PAF – классическая форма;
2. синдром Гарднера;
3. синдром Турко;
4. FAP – аттенуированная форма (AFAP)
1. При PAF – классической форме диагноз устанавливается по наличию более 100 колоректальных аденоматозных полипов или менее 100 аденоматозных полипов и родственника с PAF. До настоящего времени были описаны случаи, в которых было обнаружено несколько тысяч полипов, но в целом средний показатель составлял 500 на момент постановки диагноза. Средний возраст развития полипов, клинических проявлений кишечника, а также колоректального рака составляет 16, 29 и, соответственно, 36 лет2. Врожденная гипертрофия пигментного эпителия сетчатки очень специфична для PAF; в сетчатке присутствуют дискретные плоские пигментированные поражения, часто двусторонние, без клинических последствий. Они обычно предшествуют появлению полипоза и коррелируют с наличием мутаций между экзонами 9 и 15 гена APC4.
2. Синдром Гарднера (SG) – это ассоциация аденоматозного полипоза толстой кишки с остеомами (расположенными в основном в черепе и нижней челюсти), зубными аномалиями (отсутствие прорезывания зубов, врожденное отсутствие одного или нескольких зубов, нештатных зубов, кист и одонтом) и опухолями. мягкие ткани (эпидермоидные кисты, миома, десмоидальные опухоли). Эти доброкачественные внекишечные опухоли встречаются приблизительно у 20% людей и семей с PAF.
3. Синдром Турко (ST) – это редкая комбинация многоцентрового аденоматозного полипа толстой кишки и опухолей ЦНС (обычно медуллобластомы). У пациентов развивается колоректальная карцинома в молодом возрасте в результате злокачественной трансформации предраковых поражений или развития de novo в интактном интеркалированном эпителии.
4. AFAP – это форма заболевания, характеризующаяся наличием небольшого количества полипов, в среднем 30, расположенных в восходящей ободочной кишке. Средний возраст появления полипов составляет 36 лет, а для колоректальной карциномы – 50-55 лет (на 10-15 лет позже, чем у пациентов с классической PAF, но раньше, чем спорадические формы колоректальной карциномы). Полипы желудка (с минимальным злокачественным потенциалом), а также аденоматозные полипы тонкой кишки (с совокупным риском злокачественности 4-12%) часто связаны
Десмоидные опухоли встречаются примерно у 10% пациентов с ПАФ, чаще встречаются у женщин и вызваны хирургическим вмешательством или беременностью. Они являются основной причиной заболеваемости, из-за эффекта сжатия, который он оказывает как на кровеносные сосуды, так и на различные органы брюшной полости. Любое клиническое подозрение должно быть подтверждено визуальными исследованиями. Лечение десмоидных опухолей должно быть результатом многопрофильной команды, в которую входят хирурги, онкологи и гастроэнтерологи.
Другие опухоли вне кишечника встречаются редко и представлены аденокарциномой поджелудочной железы (2%), раком щитовидной железы (2%), аденокарциномой желудка (0,5%) и гепатобластомой у детей в возрасте до 5 лет (1,6%).
Диагноз PAF основан на клинических данных и семейном анамнезе, но должен быть подтвержден генетическим тестированием.
Пациент может быть абсолютно бессимптомным и, следовательно, получение подробного анамнеза семейных новообразований имеет важное значение для правильного диагноза. Ректальное кровотечение или абдоминальные проявления могут быть, в зависимости от стадии заболевания, предупреждающим признаком. Выявление экстраколониальных проявлений (десмоидальные опухоли или остеомы нижней челюсти) может побудить врача рекомендовать сигмоидоскопию или колоноскопию, в зависимости от возраста пациента или формы предполагаемого заболевания.
В детстве с помощью эндоскопии можно выявить только небольшие аденомы, ограниченные в основном ректосигмоидальной областью. Когда пациенты становятся старше, могут быть обнаружены сотни колоректальных или экстраколонических аденом.
Диагноз аттенуированной формы PAF намного сложнее, чем в случае классической формы, из-за широкого фенотипического изменения. Колоноскопия, а не сигмоидоскопия, была рекомендована для скрининга лиц, подверженных риску заболевания, поскольку полипы имеют тенденцию к скоплению в восходящей ободочной кишке. Диагноз AFAP основан на сочетании клинических проявлений и генетического анализа.
Генетическое тестирование используется главным образом для скрининга бессимптомных лиц с риском развития раннего PAF, а также для подтверждения диагноза у пациентов с неясными клиническими проявлениями. Как только мутация идентифицирована, тестирование может быть распространено на родственников пациента.
Тесты на мутации в гене APC доступны в нашей лаборатории для тестирования бессимптомных взрослых в группе риска.
Мутация не была выявлена ​​примерно у 25-30% пациентов с явными клиническими проявлениями PAF.
Поскольку PAF является аутосомно-доминантным наследственным заболеванием, каждый ребенок больного человека имеет 50% риск наследования мутации APC. У большинства людей с мутацией APC, предрасполагающей к PAF, она наследуется от одного из родителей.
Риск родных братьев зависит от генетического статуса родителей. Если родитель затронут или имеет мутацию APC, риск его передачи детям составляет 50%.
Около 20-30% пациентов имеют мутации de novo.
Пренатальная диагностика у беременных женщин высокого риска возможна путем анализа ДНК, выделенной из эмбриональных клеток, полученных амниоцентезом, обычно выполняемым примерно через 15-18 недель беременности, или биопсией ворсин хориона примерно через 10-12 недель беременности. Вызывающие заболевание мутации должны быть выявлены до пренатального тестирования у пострадавшего члена семьи.
Целью генетической диагностики у бессимптомных людей является выявление носителей и предотвращение преждевременной смертности от рака или других осложнений PAF. Люди с PAF имеют 100% риск развития колоректального рака, который снижается почти до нуля, когда пациенты попадают в соответствующую программу скрининга и лечения1; 3. Профилактическое хирургическое лечение, применяемое во многих центрах, – это проктоколэктомия с илеоанальным анастомозом, которая позволяет поддерживать функцию прямой кишки4.
Собранный образец – венозная кровь3.
Контейнер для сбора урожая – вакуумный контейнер, содержащий ЭДТА в качестве антикоагулянта3.
Собранное количество – 5 мл крови3.
Причины отторжения образца – использование гепарина в качестве антикоагулянта; коагулированные или гемолизированные образцы3.
Стабильность образца – 7 дней при 2-8ºC3.
Метод – секвенирование всех экзонов гена APC + анализ делеций / дупликаций MLPA3.
Отчетность и интерпретация результатов
Мутации, обнаруженные в гене APC и соответствующем генотипе, будут сообщены
Список используемой литературы
1. Элизабет Хальф, Дани Беркович, Поль Розен. Семейный аденоматозный полипоз. В Orphanet Journal of Rare Diseases, 4:22, 2009.
2. ES Boia, R Mejdi. Семейный аденоматозный полипоз (ФАП): что нужно знать и что делать – пример из практики. В Jurnalul Pediatrului –XI: 43-44, 2008.
3. Синевская лаборатория. Конкретные ссылки на рабочую технологию, использованную в 2010 году. Тип ссылки: Каталог.
4. Мохаммад Вехби, Николь М. Григлионе, Винсент В. Ян, Камил Обидин, Дж.Е. Нам, Джон М. Кертерс, Семейный аденоматозный полипоз, www.emedicine.medscape.com. Тип ссылки: Интернет-связь.

Informatii generale

Polipoza adenomatoasa familiala (PAF), desi este o afectiune rara, constituie cel mai frecvent sindrom de polipoza adenomatoasa. Are o transmitere autozomal dominanta si se caracterizeaza prin aparitia precoce a sute sau chiar mii de polipi adenomatosi diseminati in intreg colonul si rectul. In absenta tratamentului PAF evolueaza invariabil spre cancer colonic pana la varsta de 35-40 ani. In plus, exista un risc crescut si pentru alte tumori maligne.

Incidenta PAF este constanta in intreaga lume si variaza de la 1:6000 la 1:12000 nasteri, ambele sexe fiind implicate in mod egal.

Defectul genetic in PAF este reprezentat de o mutatie a liniei germinale in gena APC (adenomatosis polyposis coli), o gena supresoare tumorala situata pe bratul lung al cromozomului 5, banda q21. Aceasta este formata din 15 exoni si codifica o proteina cu greutate moleculara mare (309 kDa). Proteina APC are mai multe domenii care mediaza oligomerizarea dar si interactiunea cu o varietate de proteine intracelulare, care au un important rol in adeziunea celulara, transductia semnalului si activarea transcriptiei. Studiile efectuate atat in vitro cat si pe modele animale (ce au folosit soarecii) au demonstrat ca APC este de asemenea implicata in alinierea cromozomilor in metafaza, migrarea celulelor si promovarea apoptozei in celulele colonului1;2;4.

APC este o proteina supresoare tumorala clasica care detine un rol central in calea de semnalizare Wnt, in parte prin reglarea degradarii β-cateninei. Semnalele transmise pe calea Wnt influenteaza stabilitatea unui complex de proteine, care contine β-catenina, conductina si GSK3 (kinaza glicogen sintetazei). In absenta Wnt sau in prezenta proteinei APC de tip salbatic β-catenina este degradata in proteazom printr-un proces mediat de ubiquitina. In prezenta Wnt sau lipsa APC (asa cum se intampla in cele mai multe forme de cancer colonic), sunt exprimate genele tinta ale β-cateninei, printre care si c-MYC. Expresia genei MYC determina cresterea expresiei poliamin-ornitin-decarboxilazei (ODC), care este o protooncogena. Deci, produsul genei APC regleaza indirect transcrierea unui numar de gene critice implicate in proliferarea celulara, prin intermediul interactiunii cu factorul de transcriptie β-catenina.

Mai mult de 300 tipuri diferite de mutatii sunt recunoscute astazi ca fiind cauza polipozei adenomatoase familiale. Ele sunt reprezentate de deletii mici – 46%; insertii mici – 10% si mutatii nonsens – 28%. Au fost de asemenea raportate si alterari genice mari (13%), datele recente sugerand ca acestea pot fi responsabile de pana la 20% din cazurile de PAF1.

Cea mai frecventa mutatie, care apare la aproximativ 10% din pacienti cu PAF, este o deletie in codonul 1309, iar urmatoarea ca frecventa, (care apare la 5% din pacienti), este tot o deletie dar in codonul 1061. Mai mult de 60% din mutatiile APC se gasesc in regiunea centrala denumita MCR („mutation cluster region”), situata intre codonii 1284 si 1580; aceasta regiune este responsabila de degradarea β-cateninei.

Analiza mutatiilor genei APC indica faptul ca majoritatea anomaliilor genetice duc la sinteza unei proteine trunchiate sau nefunctionale. Pierderea functiei APC determina inhibarea apoptozei si permite β-cateninei sa se acumuleze intracelular, lucru ce determina stimularea cresterii celulare cu dezvoltarea ulterioara a adenoamelor.

Exista corelatii intre anumite mutatii si manifestarile clinice de boala, dar cu toate acestea, corelatia nu este exacta si pot aparea diferente.

Anomaliile genetice care determina aparitia formei clasice de boala se gasesc intre exonul 5 si portiunea 5′ din exonul 15, in timp ce cele asociate cu forma atenuata tind sa se grupeze in regiunea extrema 5′ a genei si portiunea 3′ a exonului 15 (proximal de codonul 1517 sau distal de 1900). Mutatiile din regiunea codonilor 1250 – 1464 sunt asociate cu polipoza severa. Pacientii cu mutatii intre codonii 1445 – 1578 pot dezvolta tumori desmoide severe1;2;4.

Diferitele mutatii ale genei APC definesc un spectru larg de sindroame cunoscute sub numele de polipoza asociata cu APC, care includ:

1. PAF – forma clasica;

2. sindromul Gardner;

3. sindromul Turcot;

4. FAP – forma atenuata (AFAP)2.

1. In PAFforma clasica diagnosticul este stabilit pe prezenta a peste 100 polipi adenomatosi colorectali sau mai putin de 100 polipi adenomatosi si o ruda cu PAF. Pana in prezent au fost descrise cazuri la care se intalneau cateva mii de polipi, dar in general media a fost de 500 in momenul diagnosticului. Varstele medii pentru dezvoltarea polipilor, a manifestarilor clinice intestinale precum si a carcinomului colorectal sunt 16, 29 si, repectiv, 36 ani2. Hipertrofia congenitala a epiteliului pigmentar retinian este inalt specifica penru PAF; sunt prezente leziuni plate pigmentate discrete la nivelul retinei, adesea bilaterale, fara consecinte clinice. Acestea preced de obicei aparitia polipozei si se coreleaza cu prezenta unor mutatii intre exonii 9 si 15 ai genei APC4.

2. Sindromul Gardner (SG) reprezinta asocierea polipozei colonice adenomatoase cu osteoamele (localizate in principal la nivelul craniului si mandibulei), anomaliile dentare (lipsa eruptiei dentare, absenta congenitala a unuia sau mai multor dinti, dinti supranumerari, chisturi si odontoame) si tumorile tesuturilor moi (chisturi epidermoide, fibroame, tumori desmoide). Aceste tumori benigne extraintestinale apar la aproximativ 20% din indivizii si familiile cu PAF.

3. Sindromul Turcot (ST) este o combinatie rara de polipoza adenomatoasa colonica multicentrica si tumori ale SNC (de obicei, meduloblastoame). Pacientii dezvolta carcinom colorectal in perioada de adult tanar, fie ca urmare a transformarii maligne a leziunilor precanceroase, fie a dezvoltarii de novo in epiteliul intact intercalat.

4. AFAP este o forma de boala caracterizata prin prezenta unui numar redus de polipi, in medie 30, localizati in colonul ascendent. Varsta medie de aparitie a polipilor este 36 ani, iar pentru carcinomul colorectal este de 50-55 ani (cu 10-15 ani mai tarziu fata de pacientii cu PAF clasic, dar mai devreme decat formele sporadice de carcinom colorectal). Se asociaza frecvent polipi gastrici (cu potential malign minim) precum si polipi adenomatosi ai intestinului subtire (cu un risc cumulat de malignizare de 4-12%)2.

Tumorile desmoide apar la aproximativ 10% din pacientii cu PAF, sunt mai frecvente la femei, si sunt induse de interventii chirurgicale sau sarcina. Acestea reprezinta cauza principala de morbiditate, ca urmare a efectului de compresiune pe care il exercita atat pe vasele sanguine, cat si pe diversele organe abdominale. Orice suspiciune clinica trebuie confirmata prin examene imagistice. Tratamentul tumorilor desmoide ar trebui sa fie rezultatul unui echipe multidisciplinare care sa includa chirurgi, oncologi si gastroenterologi.

Alte tumori extra-intestinale sunt rare si sunt reprezentate de adenocarcinomul pancreatic (2%), cancerul tiroidian (2%), adenocarcinomul gastric (0.5%) si hepatoblastomul la copiii mai mici de 5 ani (1.6%).

Diagnosticul PAF se bazeaza pe datele clinice si istoricul familial, dar trebuie confirmat prin teste genetice.

Pacientul poate fi complet asimptomatic si de aceea obtinerea unui istoric detaliat privind neoplasmele familiale este esentiala pentru un diagnostic corect. Sangerarile rectale sau manifestarile abdominale pot fi, in functie de stadiul bolii, un semn de alarma. Identificarea unor manifestari extracolonice (tumori desmoide sau osteoame la nivelul mandibulei) poate determina medicul sa recomande sigmoidoscopie sau colonoscopie, in functie de varsta pacientului sau forma de boala suspicionata.

In timpul copilariei, prin endoscopie pot fi identificate doar adenoame mici, limitate in principal la regiunea rectosigmoidiana. Pe masura ce pacientii inainteaza in varsta pot fi intalnite sute de adenoamele colorectale sau cu localizare extracolonica.

Diagnosticul de PAF forma atenuata este mult mai complex decat in cazul formei clasice, datorita variatiei fenotipice largi. Colonoscopia, mai degraba decat sigmoidoscopia, a fost recomandata pentru screening-ul indivizilor ce prezinta risc de boala, deoarece polipii tind sa se grupeze in colonul ascendent. Diagnosticul AFAP se bazeaza pe o combinatie de manifestari clinice si analize genetice1.

Testarea genetica este folosita in principal pentru screening-ul persoanelor asimptomatice cu risc de a dezvolta precoce PAF, dar si pentru confirmarea diagnosticului la pacientii cu manifestari clinice neclare. O data identificata mutatia testarea poate fi extinsa si la rudele pacientului.

Pentru testarea adultilor asimptomatici cu risc sunt disponibile in laboratorul nostru teste pentru evidentierea mutatiilor de la nivelul genei APC.

La aproximativ 25-30% dintre pacientii cu manifestari clinice evidente de PAF nu a fost identificata nicio mutatie.

Deoarece PAF este o afectiune ereditara ce se transmite autozomal dominant, fiecare copil al unei persoane afectate are un risc de 50% de a mosteni mutatia APC. La majoritatea persoanelor cu o mutatie APC predispozanta la PAF aceasta este mostenita de la unul dintre parinti.

Riscul fratilor persoanei afectate depinde de statusul genetic al parintilor. Daca un parinte este afectat sau este purtatorul unei mutatii APC riscul ca aceasta sa fi transmisa copiilor este de 50%.

Aproximativ 20-30% din pacienti au mutatii de novo.

Diagnosticul prenatal la gravidele cu risc crescut este posibil prin analiza ADN-ului extras din celulele fetale obtinute prin amniocenteza, de obicei efectuata la aproximativ 15-18 saptamani de gestatie, sau biopsia vilozitatilor coriale, la aproximativ 10-12 saptamani de gestatie. Mutatiile cauzatoare de boala trebuie sa fie identificate inainte de testarea prenatala la un membru afectat al familiei.

Scopul diagnosticului genetic la persoanele asimptomatice este identificarea purtatorilor si prevenirea mortalitatii premature prin cancer sau de alte complicatii ale PAF. Indivizii cu PAF au risc de 100% de a dezvolta cancer colorectal, care este redus aproape la zero atunci cand pacientii sunt introdusi intr-un program de screening si tratament adecvat1;3. Tratamentul chirurgical profilactic aplicat in multe centre este proctocolectomia cu anastomoza ileo-anala care permite mentinerea functiei rectale4.

Specimen recoltat – sange venos3.

Recipient de recoltare – vacutainer ce contine EDTA ca anticoagulant3.

Cantitate recoltata –  5 mL sange3.

Cauze de respingere a probei – folosirea heparinei ca anticoagulant; probe coagulate sau hemolizate3.

Stabilitate proba7 zile la 2-8ºC3.

Metodasecventierea tuturor exonilor genei APC+ analiza deletiilor/duplicatiilor MLPA3. 

Raportarea si interpretarea rezultatelor

Vor fi comunicate mutatiile depistate in gena APC si genotipul respectiv3.

 

Bibliografie

1. Elizabeth Half, Dani Bercovich, Paul Rozen. Familial adenomatous polyposis. In Orphanet Journal of Rare Diseases, 4:22, 2009.

2. ES Boia, R Mejdi. Familial Adenomatous Polyposis (FAP): What Must Be Known And What Should Be Done – Case Report. In Jurnalul Pediatrului –XI: 43-44, 2008.

3. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.

4. Mohammad Wehbi, Nicole M Griglione, Vincent W Yang, Kamil Obideen, Jae W Nam, John M Carethers, Familial Adenomatous Polyposis, www.emedicine.medscape.com. Ref Type: Internet Communication.

< inapoi la lista

Pret 57770.00 MDL