int(0)

Teste de laborator

Pachete de analize medicale

Planșa anatomică

Teste de la A la Z A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z
Teste Laborator
Product categories
Pachete analize Plansa anatomica
< inapoi la lista

Mutatia factorului V Leiden-detectie si genotipare

Pret 800.00 MDL

Тромбофилия является наследственным или приобретенным состоянием, связанным с индивидуальной предрасположенностью к тромботическим явлениям.
Основными клиническими проявлениями тромбофилии являются: тромбоэмболические заболевания, периодические невынашивания беременности с неопределенной причиной, осложнения беременности (преэклампсия, задержка внутриутробного развития, апоплексия матки и матки, гибель плода в утробе матери, преждевременные роды), острые коронарные синдромы (нестабильная стенокардия) , асептический некроз головки бедренной кости.
Тромбофилию следует подозревать в следующих клинических ситуациях: тромботические явления у молодых пациентов (<50 лет), рецидивирующий тромбоз, семейные анамнезы тромбоэмболических расстройств, осложнения многоплодной беременности, венозный тромбоз в «необычных» анатомических областях: воротная вена, печеночные вены, мезочастицы церебральный и т. д.
До 70% пациентов с диагнозом формы тромбофилии имеют один или несколько основных генетических дефектов. Из них фактор Лейдена V и мутация протромбина G20210A являются причиной более половины случаев наследственной тромбофилии. Эти мутации были обнаружены относительно недавно (с 1994 года) и основаны на уникальных нуклеотидных заменах, которые в настоящее время могут быть обнаружены молекулярными методами6.
Лейденский фактор V является аномальным вариантом фактора V, который становится устойчивым к действию активированного белка C (APC). Он генерируется точечной мутацией в гене синтеза хромосомы 1q23, кодирующего фактор V, путем замены гуанина (G) на аденин (A) в положении 1691. В белковом продукте нуклеотидная замена выражается путем замены аргинина в положении 506 глютамином ( мутация R506Q). Модифицированный таким образом фактор V называется фактором Лейдена, изменение состоит в изменении сайта связывания АРС.
В результате этой мутации фактор V Лейден инактивируется в 10 раз медленнее, чем обычно, и дольше сохраняется в кровообращении, что приводит к увеличению выработки тромбина и, следовательно, к гиперкоагуляции2; 3.
Генетический анализ показал, что эта мутация ответственна за 85-90% случаев устойчивости к АРС4.
Мутация передается аутосомно-доминантно и присутствует примерно у 3-7% населения Кавказа, что является самой распространенной причиной наследственной тромбофилии2.
Эта мутация была подтверждена у пациентов с тромбозом глубоких вен, тромбоэмболиями легочной артерии, окклюзией центральной вены сетчатки, тромбозом синусового мозга и тромбозом печеночных вен. Мутация выявляется у 10-20% пациентов в первом эпизоде ​​венозного тромбоза. Кроме того, 40% пациентов <50 лет с первым эпизодом венозного тромбоза и 60% беременных пациентов с венозным тромбозом являются носителями этой мутации.
Риск тромбоза зависит от гомо- или гетерозиготного статуса этой мутации. Гетерозиготные люди имеют риск тромбоза в 4-8 раз выше, чем люди с нормальным фактором V, в то время как гомозиготы имеют риск в 80-100 раз выше.
Риск возрастает экспоненциально у людей, которые ассоциируются с другими тромботическими факторами риска, такими как: сосуществование других генетических дефектов (дефицит белка C, S, антитромбин III, мутация гена протромбина, мутация в гене, кодирующем метилентетрагидрофолатредуктазу -MTHFR-, и связана с гиперемией). ), использование оральных контрацептивов, беременность5; 6.
Таким образом, тромбоз глубоких вен и тромбоз мозгового синуса чаще возникают у пациентов, принимающих оральные контрацептивы, беременных или в послеродовом периоде6.
Middendorf и коллеги провели исследование (2004) о роли фактора Лейдена у пациентов с инфарктом миокарда. Результаты исследования показали, что пациенты с лейденской мутацией фактора V имеют предрасположенность к инфаркту миокарда, и традиционные факторы риска развития ишемической болезни сердца будут играть менее важную роль у этих пациентов2.
Что касается осложнений беременности, присутствие фактора V Лейдена, а также мутаций гена протромбина и гена MTHFR связано с повышенным риском повторного прерывания беременности, особенно во втором и третьем триместрах1.
Скрининг бессимптомных конечностей в мутированных семьях широко не рекомендуется из-за низкого риска фатального венозного тромбоза. Тем не менее, исследование может быть полезным в ситуациях, когда беременность или оральные контрацептивы рассматриваются у людей с семейным анамнезом рецидивирующего венозного тромбоза в возрасте <50 лет. Лица, запрашивающие тестирование, и те, кто получает положительный результат, должны быть проинформированы о последствиях диагноза и о признаках или симптомах, требующих неотложного медицинского вмешательства2;
Тест, выполненный в лаборатории Синево, использует метод ПЦР в реальном времени на приборе LightCycler для обнаружения и генотипирования мутации фактора V Лейдена у пациентов с клиническим подозрением на тромбофилию4.
Собранный образец – венозная кровь4.
Контейнер для сбора урожая – вакуумный контейнер, содержащий ЭДТА в качестве антикоагулянта4.
Собранное количество – столько, сколько позволяет вакуум4.
Причины отторжения образца – использование гепарина в качестве антикоагулянта4.
Стабильность образца – 7 дней при 2-8ºC4.
Метод – ПЦР в реальном времени (LightCycler): цепная реакция полимеризации с обнаружением накопленного продукта ПЦР в режиме реального времени путем измерения испускаемой флуоресценции; в конце циклов амплификации проводится генотипирование путем анализа кривой плавления4.
Интерпретация результатов
Для пациента сообщается об одном из 3 возможных результатов:
– гомозиготный дикий генотип (отрицательный для мутации фактора V Лейдена);
– гетерозиготный генотип (содержит дикий и мутантный аллель для фактора V);
-гомозиготный мутантный генотип (содержит оба мутантных аллеля
Пределы и помехи
На уровне гена фактора V, в дополнение к мутации фактора V Лейдена в положении 1691, возможны еще 3 мутации: 1692, 1689 и 1696. При генотипировании эти редкие мутации приводят к ложноположительному результату (генотип гетерозиготного или гомозиготного мутанта) , Поскольку только повышенная резистентность к активированному белку С связана только с мутацией фактора Лейдена V, всем пациентам с положительным результатом теста на ПЦР необходимо выполнить функциональный (коагуляционный) тест для оценки устойчивости к активированному белку С, если что этот скрининг ранее не проводился4.
Список используемой литературы
1. Энн М. Гроновски. Потеря беременности. В Справочнике клинических лабораторных исследований во время беременности, Humana Press, Totowa, New Jersey, 2004, 341.
2. Донна М. Шоу. Фактор V Лейден: обзор. В Clin Lab Sci 2006; 19 (4): 218.
3. Э. Урлеяну, Ге. Бакальбаша, И. Урлешану. Тромбофилия – акушерские последствия. В Акушерстве № 5/2006.
4. Синевская лаборатория. Конкретные ссылки на рабочую технику 2006 года. Тип ссылки: Каталог.
Лаборатория Корпорации Америки. Каталог услуг и руководство по интерпретации. Фактор V Лейденский мутационный анализ. www.labcorp.com 2003. Тип ссылки: Интернет-связь
5. Ричард Д. Пресс. Клиническое исследование фактора V Лейдена (R506Q) для диагностики и лечения тромбоэмболических нарушений. В Arch Pathol, ноябрь 2002 г.

SKU: BM05 Durata 10 zile sânge venos

Informaţii generale şi recomandări
Trombofilia reprezintă o condiţie ereditară sau dobândită asociată cu o predispoziţie individuală faţă de evenimente trombotice.
Principalele manifestări clinice generate de trombofilie sunt: boala tromboembolică, avorturile recurente de cauză incertă, complicaţii ale sarcinii (preeclampsie, retard de creştere intrauterină, apoplexia uteroplacentară, moartea fătului în uter, naştere prematură), sindroamele coronariene acute (angina instabilă, infarct miocardic), necroza aseptică de cap femural.
Trombofilia trebuie suspectată în următoarele situaţii clinice: evenimente trombotice survenite la pacienţi tineri (<50 ani), tromboze recurente, antecedente familiale de afecţiuni tromboembolice, complicaţii multiple ale sarcinii, tromboze venoase în teritorii anatomice “neobişnuite”: vena portă, vene hepatice, mezenterice, cerebrale, etc.
Până la 70% dintre pacienţii diagnosticaţi cu o forma de trombofilie prezintă unul sau mai multe defecte genetice majore. Dintre acestea, factorul V Leiden şi mutaţia G20210A a protrombinei sunt responsabile pentru mai mult de jumătate din cazurile de trombofilie ereditară. Aceste mutaţii sunt relativ recent descoperite (din 1994) şi au la baza substituţii nucleotidice unice, care pot fi detectate în prezent prin tehnici moleculare6.
Factorul V Leiden constituie o variantă anormală a factorului V ce devine rezistent la acţiunea proteinei C activate (APC). Este generat de o mutaţie punctiformă a genei de pe cromozomul 1q23 care codifică sinteza factorului V, prin substituţia guaninei (G) cu adenina (A) în poziţia 1691. În produsul proteic, substituţia nucleotidică se exprimă prin înlocuirea argininei din poziţia 506 cu glutamina (mutaţia R506Q). Factorul V astfel modificat este denumit factor Leiden, alterarea constând în modificarea situsului de legare a APC.
Ca urmare a acestei mutaţii, factorul V Leiden este inactivat de 10 ori mai lent decât cel normal şi persistă mai mult timp în circulaţie, cea ce conduce la o generare crescută de trombină şi astfel, la hipercoagulabilitate2;3.
Analizele genetice au indicat faptul că această mutaţie este responsabilă de 85-90% din cazurile de rezistenţă la APC4.
Mutaţia este transmisă autozomal co-dominant şi este prezentă la aproximativ 3-7% din populaţia caucaziană, fiind astfel cea mai frecventă cauză de trombofilie ereditară2.
Aceasta mutaţie a fost confirmată la pacienţi cu tromboză venoasă profundă, embolie pulmonară, ocluzia venei centrale a retinei, tromboza sinusurilor cerebrale şi tromboza venelor hepatice. Mutaţia este depistată la 10-20% dintre pacienţii aflaţi la primul episod de tromboză venoasă. De asemenea, 40% din pacienţii <50 ani aflaţi la primul episod de tromboză venoasa şi 60% din pacientele gravide cu tromboză venoasă sunt purtători ai acestei mutaţii.
Riscul de tromboză depinde de statusul homo- sau heterozigot pentru această mutaţie. Indivizii heterozigoţi au un risc de tromboză de 4-8 ori mai mare decât persoanele cu factor V normal, în timp ce homozigoţii prezintă un risc de 80-100 ori mai mare5.
Riscul creşte exponenţial la persoanele care asociază şi alţi factori de risc trombotic, cum ar fi: coexistenţa altor defecte genetice (deficit de proteină C, S, antitrombină III, mutaţia genei protrombinei, mutaţia genei care codifică metilentetrahidrofolat reductaza -MTHFR- şi se asociază hiperhomocisteinemie), consumul de anticoncepţionale orale, sarcina5;6.
Astfel, tromboza venoasă profundă şi tromboza sinusurilor cerebrale apar mai frecvent la pacientele care iau anticoncepţionale orale, gravide sau aflate în perioada postpartum6.
Middendorf şi colaboratorii săi au efectuat un studiu (2004) despre rolul factorului Leiden la pacienţii cu infarct miocardic. Concluziile studiului au fost că pacienţii care prezintă mutaţia factorului V Leiden au o predispoziţie pentru infarctul miocardic iar factorii tradiţionali de risc pentru boala coronariană ar avea un rol mai puţin important la aceşti pacienţi2.
În ceea ce priveşte complicaţiile sarcinii, prezenţa factorului V Leiden, ca şi cea a mutaţiilor genelor protrombinei şi MTHFR, se asociază cu un risc crescut de pierderi recurente de sarcină, în special în trimestrele II şi III1.
Screening-ul membrilor asimptomatici în familiile la care s-a depistat mutaţia nu este recomandat pe scară largă, datorita riscului scăzut de tromboze venoase letale. Cu toate acestea, investigarea poate aduce beneficii în situaţiile în care se au în vedere sarcina sau administrarea de contraceptive orale, la persoanele care au antecedente familiale de tromboze venoase recurente apărute la vârste < 50 ani. Persoanele care solicita testarea şi cele care obţin un rezultat pozitiv trebuie informate în legătura cu implicaţiile diagnosticului şi cu semnele sau simptomele care necesită intervenţie medicală de urgenţă2;6.
Testul efectuat în laboratorul Synevo utilizează tehnica real-time PCR pe instrumentul LightCycler pentru detecţia şi genotiparea mutaţei factorului V Leiden, la pacienţi cu suspiciune clinică de trombofilie4.
Specimen recoltat – sânge venos4.
Recipient de recoltare – vacutainer ce conţine EDTA ca anticoagulant4.
Cantitate recoltată – cât permite vacuumul4.
Cauze de respingere a probei – folosirea heparinei ca anticoagulant4.
Stabilitate probă – 7 zile la 2-8ºC4.
Metodă Real-time PCR (LightCycler): reacţie de polimerizare în lanţ cu detecţie în timp real a produsului PCR acumulat, prin măsurarea fluorescenţei emise; la sfârşitul ciclurilor de amplificare se efectuează genotiparea, prin analiza curbei de topire4.
Interpretarea rezultatelor
Pentru un pacient, se raportează unul din cele 3 rezultate posibile:
– genotip sălbatic homozigot (negativ pentru mutaţia factorului V Leiden);
– genotip heterozigot (conţine o alelă sălbatică şi una mutantă pentru factorul V);
– genotip mutant homozigot (conţine ambele alele mutante)4.
Limite şi interferenţe
La nivelul genei factorului V, pe lângă mutaţia factorului V Leiden în poziţia 1691, mai sunt posibile alte 3 mutaţii: 1692, 1689 şi 1696. La genotipare, aceste mutaţii rare vor conduce la un rezultat fals-pozitiv (genotip heterozigot sau mutant homozigot). Deoarece numai mutaţia factorului V Leiden se asociază cu o rezistenţă crescută la proteina C activată, toţi pacienţii care prezintă un rezultat pozitiv la testul PCR vor trebui să efectueze un test funcţional (de coagulare) pentru a evalua rezistenţa la proteina C activată, în cazul în care acest screening nu s-a efectuat anterior4.


Bibliografie

1. Ann M. Gronowski. Pregnacy Loss. In Handbook of Clinical Laboratory Testing During Pregnancy, Humana Press, Totowa, New Jersey, 2004, 341.
2. Donna M. Shaw. Factor V Leiden: An Overview. In Clin Lab Sci 2006; 19(4): 218.
3. E. Urleţeanu, Ghe. Bacalbaşa, I. Urleţeanu. Trombofiliile-implicaţii obstreticale. În Obstretica nr.5/2006.
4. Laborator Synevo. Referinţe specifice tehnologiei de lucru utilizate 2006. Ref Type: Catalog.
Laboratory Corporation of America.Directory of Services and Interpretive Guide. Factor V Leiden Mutation Analysis. www.labcorp.com 2003. Ref Type: Internet Communication
5. Richard D. Press. Clinical Utility of Factor V Leiden (R506Q) testing for diagnosis and management of thromboembolic disorders. In Arch Pathol, nov.2002.

< inapoi la lista

Pret 800.00 MDL