int(0)

Teste de laborator

Pachete de analize medicale

Planșa anatomică

Teste de la A la Z A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z
Teste Laborator
Product categories
Pachete analize Plansa anatomica
< inapoi la lista

Toxoplasma gondii ADN in lichid amniotic

Pret 2920.00 MDL

Общая информация

Токсоплазмоз (Toxoplasma gondii)

ЭтиологияТоксоплазмоз – заболевание из группы антропозоонозоввызываемое облигатным внутриклеточным простейшим Toxoplasma gondii (класс Sporozoa, отряд Coccidia), приводящее к тяжелому поражению нервной системы и внутренних органов.

Эпидемиология. Резервуаром инфекции является кошка и многие другие виды животных (собаки, свиньи, крупный рогатый скот, овцы, полевые грызуны, дикие и домашние птицы и т.д.), которые могут служить источниками инфекции для людей. Полный цикл развития токсоплазмы происходит только в семействе кошачьих (к которому принадлежат и домашние кошки). При заражении кошки алиментарным путем (поедании пораженных грызунов) паразиты проникают в эпителиальные клетки кишечника, где после нескольких бесполых генераций формируются макро- и микрогаметы. Половой процесс завершается образованием ооцист, которые выделяются во внешнюю среду. При активной инфекции ооцисты в течение нескольких недель выделяются с кошачьими экскрементами, становятся заразными через 1-5 дней и сохраняют жизнеспособность до нескольких месяцев. Промежуточные хозяева – все млекопитающие, птицы, рептилии. Человек также является промежуточным хозяином паразита, но не выделяет возбудителя в окружающую среду и не представляет опасности для окружающих. При попадании ооцист в организм промежуточного хозяина, жизненный цикл токсоплазмы продолжается в мышечной и других тканях зараженного организма. Жизненный цикл токсоплазмы включает 3 типа форм: трофозоит – инвазивная форма, отвечающая за острые проявления инфекции; циста — отвечает за персистентную и латентную инфекции; оoциста – не встречается у людей, а только у кошек (главный хозяин), играя роль в эволюционном цикле токсоплазмы и передаче инфекции. Человек может заразиться при употреблении недостаточно термически обработанного мяса (содержащего цисты), при употреблении пищи, загрязненной почвой (содержащих зрелые цисты) или при контакте с экскрементами кошки (игровые площадки для детей, геофагия, грязные овощи). Возможен трансплацентарный путь передачи инфекции, заражение возможно также во время родов. Доказано заражение плода только от женщин с первичной инфекцией, приобретенной во время данной беременности. У женщин с хроническим или латентным токсоплазмозом передача возбудителя плоду не доказана. Риск инфицирования плода с последующим развитием пренатального токсоплазмоза при первичной инфекции у матери составляет: I триместр – 4-17%, II триместр – 24-29%, III триместр – 60-62%. Редкими путями передачи инфекции являются переливание крови от лиц, находящихся на стадии паразитемии. Восприимчивость к инфекции повсеместная. Заболеваемость варьирует, в зависимости от возрастной группы и популяции, в диапазоне от 20 до 80%, при этом процент заболеваемости увеличивается с возрастом.

Патогенез. Токсоплазма является облигатным внутриклеточным паразитом, тропным к нейронам, микроглии, клеткам сосудистой оболочки и сетчатки, а также к клеткам ретикулоэндотелиальной системы. В организме человека токсоплазмы размножаются в кишечнике, распространяются лимфогенным и гематогенным путем. Фаза лимфогенного заноса (увеличиваются и воспаляются лимфатические узлы) сменяется гематогенной диссеминацией. Стадия нахождения паразита в крови короткая (до нескольких дней). Попадая во внутренние органы, токсоплазмы вызывают в них воспалительные явления. Особенно часто поражаются нервная система, сетчатка, печень, миокард. В этих органах токсоплазмы находятся внутриклеточно и экстрацеллюлярно. Токсоплазмы способны образовывать цисты в тканях, вызывая состояние латентной инфекции. Активизация паразита происходит при неблагоприятных для макроорганизма условиях и снижении его иммунологической реактивности. В патогенезе токсоплазмозного поражения нервной системы имеют значение очаговые воспалительные явления (некротизирующий энцефалит), дисциркуляторные нарушения, связанные с васкулитом, обструкция ликворных путей, приводящая к гидро- и микроцефалии.

Клинические проявления. Токсоплазмозом могут заболеть лица любого возраста, однако наиболее часто болеют дети. Выделяют приобретенную и врожденную формы токсоплазмоза.

При приобретенной форме инкубационный период составляет от 3 до 14 дней. Продромальный период характеризуется общим недомоганием, мышечными и суставными болями, сохраняющимися обычно до нескольких недель, иногда месяцев. Острая стадия заболевания проявляется повышением температуры, ознобом, лимфоаденопатией, появляется генерализованная макулопапулезная сыпь, отсутствующая только на подошвах, ладонях, волосистой части головы. Наряду с общими признаками инфекционного заболевания, имеется клиническая картина поражения различных органов: миокардит, пневмония, очаговый некротический нефрит, гепатит. Поражение нервной системы проявляется менингитом, энцефалитом, менингоэнцефалитом, энцефаломиелитом. Редко наблюдаются радикулоневритическая и малосимптомная формы.

Врожденная форма. Инфицирование плода в первом триместре беременности приводит к спонтанным выкидышам из-за гибели зародыша в результате повреждений трофобластов; во втором – мертворождению, рождению детей с аномалиями развития (энцефалит, менингоэнцефалит, микроцефалия, гидроцефалия, миокардиты, гепатоспленомегалия, микрофтальмия, хориоретинит), третьем – рождению детей с аномалиями развития, которые могут проявляться отдаленно нарушениями зрения и слуха, задержкой психомоторного развития. Только треть детей, инфицированных внутриутробно, имеют при рождении клинически выраженный токсоплазмоз, в остальных случаях – это бессимптомные формы токсоплазменной инфекции, которые через месяцы и годы могут дать поздние клинические проявления. На ранних стадиях развития врожденный токсоплазмоз проявляется генерализованной формой заболевания, при этом во всех пораженных органах (печень, селезенка, миокард, легкие, надпочечники, головной мозг и другие) в местах нахождения токсоплазм возникают мелкие очаги некроза. В дальнейшем очаги некроза рассасываются с образованием кист и их обызвествлением. В случае если инфицирование происходит незадолго до рождения ребенка, характерны проявления генерализованной инфекции с поражением внутренних органов. При более ранних сроках инфицирования плода генерализация может закончиться внутриутробно, тогда ребенок рождается уже с выраженными симптомами поражения ЦНС (энцефалит, менингоэнцефалит). Поздние проявления токсоплазмоза могут обнаружиться к концу первого года жизни (наростающая гидроцефалия) или позднее (к 4-7 годам — хориоретинит, к 10-12 годам – имбецильность).

Лица с ослабленным иммунитетом. Лица с ослабленной иммунной системой (СПИД, длительная иммуносупрессивная терапия, трансплантация органов) чрезвычайно восприимчивы и заболевание у них протекает в тяжелой форме, возможны осложнения: энцефалит и сепсис. У ВИЧ-положительных пациентов и лиц с дефектами Т-лимфоцитов или лиц с длительной кортикостероидной терапией чаще встречается хроническая паразитемия.

Лабораторная диагностика токсоплазмоза. Следует различать токсоплазмоинфекцию (носительство) и токсоплазменное заболевание (токсоплазмоз). Поэтому основным в лабораторной диагностике является не сам факт обнаружения положительного иммунного ответа (антител), а уточнение характера течения процесса – носительство или болезнь.

Лабораторная диагностика основывается на выявлении серологических маркеров (иммуноглобулинов IgМ, IgA, IgG и авидности IgG) и молекулярных методах (выявление методом ПЦР вируса в различных биологических материалах).

Выявление Toxoplasma gondii методом ПЦР (качественный анализ)

Материал Транспортная среда, пробирка   Правила и условия транспортировки
Кровь Вакутайнер с антикоагулянтом КЗ-ЭДТА   Стандартные
Ликвор Эппендорф пустой; Стерильный транспортный контейнер   Стандартные
Амниотическая жидкость  Эппендорф пустой; Стерильный транспортный контейнер   Стандартные
Метод тестирования ПЦР качественный анализ
Референтные значения Не обнаружена / Обнаружена.

 

Показания к назначению
Выявление ДНК Toxoplasma gondii в клиническом материале
Интерпретация результатов
Обнаружено Не обнаружено
В анализируемом образце биологического материала найден фрагмент ДНК,

специфичный для Toxoplasma gondii

В анализируемом образце биологического материала не найдено

фрагментов ДНК, специфичных для Toxoplasma gondii

Informatii generale si recomandari

Toxoplasma gondii este un protozoar apartinand ordinului Coccidia, clasa Sporozoare, foarte apropiat de genul Isospora. Ciclul de viata al Toxoplasma presupune 3 forme:

-trofozoit: forma invaziva responsabila de manifestarile acute ale infectiei;

-chist: responsabil de infectia persistenta si  latenta;

-oochist: nu se intalneste la om, ci numai la pisica (gazda obligatorie), avand rol in ciclul evolutiv al Toxoplasmei si  in transmiterea infectiei7.

Parazitul este ubicuitar in natura, fiind intalnit in mod obisnuit in solurile din regiuni calde si umede ce sunt contaminate cu materii fecale de la animale. Parazitul poate infecta orice mamifer, insa principalul rezervor al bolii este reprezentat de familia Felidae (din care face parte si pisica), unde parazitul se reproduce si este eliminat prin materiile fecale sub forma de oochisti in cursul infectiei acute.

Infectia se transmite la om prin ingestia de carne cruda sau insuficient preparata termic ce contine chisturi tisulare, consumul de apa sau alimente contaminate cu oochisti sau vertical (transplacentar) de la o mama ce a dobandit infectia in cursul sarcinii. Mult mai rara este transmiterea printr-un transplant de organ infectat sau o transfuzie cu celule sangvine contaminate.

Receptivitatea fata de infectie este generala. Toxoplasma gondii se multiplica intracelular la locul de invazie (tractul gastrointestinal), iar bradizoitii eliberati din chisturile tisulare sau sporozoitii eliberati din oochisturi penetreaza si se multiplica in celulele epiteliale intestinale. Formele parazitare se propaga mai intai in ganglionii limfatici mezenterici dupa care ajung si la organe situate la distanta, pe cale limfatica sau sangvina. Toxoplasma infecteaza virtual toate tipurile celulare, insa exista o predilectie pentru neuroni, microglii, celulele coroidei si retinei, precum si  pentru celulele apartinand sistemului reticuloendotelial. O data cu dezvoltarea raspunsului imun umoral sau celular supravietuiesc doar acei paraziti care sunt protejati de un habitat intracelular sau se gasesc in interiorul chisturilor tisulare. Un raspuns imun eficient reduce semnificativ numarul tahizoitilor din toate tesuturile. Formarea chisturilor tisulare se produce in numeroase tesuturi si organe in cursul primei saptamani de infectie; acestea sunt responsabile de infectia reziduala (cronica sau latenta) si persista in principal la nivelul creierului, muschilor scheletici, miocardului si ochiului5.

Frecventa infectiei variaza dupa grupe de varsta si  populatie intre 20 si  80%, procentul crescand cu varsta, asa cum rezulta din prezenta testelor serologice pozitive, al caror procent creste cu varsta11.

Sunt descrise 5 forme de toxoplasmoza:

-dobandita la un pacient imunocompetent;

-dobandita sau reactivata la un pacient imunodeprimat;

-oculara;

-toxoplasmoza la gravide;

-congenitala5.

La pacientii imunocompetenti infectia evolueaza in majoritatea cazurilor asimptomatic. Atunci cand infectia devine clinic manifesta, pacientul prezinta un sindrom mononucleozic autolimitant cu astenie fizica si  adenopatii. Pentru diagnosticul diferential al limfadenopatiilor pot fi utilizate testele serologice11.

Daca la persoanele normale evolutia toxoplasmozei este benigna, la pacientii imunodeprimati (neoplazii hematologice: boala Hodgkin si limfoamele non-hodgkiniene, transplant de organe, SIDA, corticoterapie de lunga durata, chimioterapie, terapia anti-TNF alfa) consecintele infectiei pot fi foarte grave, de aceea diagnosticul trebuie stabilit cat mai repede. Febra de cauza neprecizata poate fi singura manifestare a toxoplasmozei in stadiu precoce la aceasta categorie de pacienti. Encefalita, pneumonita si miocardita reflecta infectia activa a organelor cel mai frecvent afectate.

Encefalita indusa de T. gondii este cea mai frecventa forma de manifestare a toxoplasmozei si cauza cea mai comuna de leziuni SNC focale la pacientii cu SIDA. Pneumonita este frecventa si adesea omisa ca diagnostic. Infectia diseminata nu este neobisnuita, iar manifestarile clinice pot sa nu reflecte intotdeauna severitatea bolii. Mortalitatea se apropie de 100% in absenta tratamentului initiat precoce. Toxoplasmoza la imunodeprimati poate fi consecinta reactivarii unei infectii latente sau poate fi rezultatul unei infectii primare dobandite cel mai adesea prin transplantul unui organ infectat5.

La pacientii imunodeprimati rezultatele serologiei trebuie interpretate cu prudenta, deoarece acestia prezinta de obicei titruri scazute de anticorpi IgG, iar anticorpii IgM pot fi nedetectabili. Reactia de polimerizare in lant (PCR) care detecteaza T. gondii ADN (in special gena B1) in sange si diverse lichide biologice s-a dovedit a fi o metoda sensibila si specifica pentru diagnosticul infectiei la acesti pacienti. Astfel, pentru diagnosticul encefalitei toxoplasmozice cel mai util produs patologic este lichidul cefalo-rahidian (LCR), testul PCR avand o sensibilitate si o specificitate de 83.3%, respectiv 95.7%8;9;12. Determinarea ADN-ului in sange este importanta pentru diagnosticul toxoplasmozei generalizate si mai putin pentru encefalita toxoplasmozica (in cazul infectiei SNC parazitemia este mai rar prezenta). Se pare ca tratamentul influenteaza sensibilitatea metodei PCR; sensibilitatea este mai mare daca probele de sange sau de LCR se recolteaza fie inainte, fie in prima saptamana de tratament4;5;9;12.

Infectia oculara la pacientii imunocompetenti produce corioretinita acuta caracterizata prin inflamatie severa si necroza. La pacientii cu SIDA corioretinita se manifesta prin panoftalmita segmentara si zone de necroza de coagulare asociate cu chisturi tisulare si tahizoiti. In jurul vaselor retiniene trombozate pot fi vizualizate numeroase microorganisme; se pot produce leziuni multiple si bilaterale. Pacientii avand corioretinita activa indusa de Toxoplasma gondii nu prezinta de obicei anticorpi IgM detectabili, iar titrurile de anticorpi IgG sunt scazute. In majoritatea cazurilor corioretinita toxoplasmozica este diagnosticata prin examen oftalmologic. Cu toate acestea exista pacienti cu modificari atipice ale retinei; la acestia detectarea ADN-ului parazitului in umoarea apoasa sau in cea vitroasa confirma diagnosticul5.

Infectia acuta cu Toxoplasma este asimptomatica la majoritatea gravidelor. Cu toate acestea este importanta datorita posibilitatii transmiterii infectiei la fat. In cea mai mare parte a cazurilor transmiterea la fat este limitata la acele paciente care dobandesc infectia in cursul sarcinii. Exceptii rare au fost observate la unele femei imunocompetente care au fost infectate cu T. gondii cu putin timp inaintea conceptiei. Rareori transmiterea la fat se produce prin reactivarea unei infectii latente la gravide imunodeprimate infectate inaintea conceptiei (coinfectie HIV – T.gondii,  paciente cu LES sub corticoterapie). Pentru a evita complicatiile din cursul sarcinii se recomanda evaluarea statusului imun inainte de conceptie. Se considera astfel ca femeile seropozitive inainte de a ramane insarcinate sunt protejate in ceea ce priveste transmiterea infectiei viitorului fat. Pe de alta parte, femeile seronegative prezinta riscul de a contracta infectia in cursul sarcinii, iar la acestea trebuie aplicate masuri profilactice2;5.

Infectia fetala in cursul primului trimestru de sarcina se produce mai rar, dar se asociaza cu un risc mai mare de avort spontan si aparitie a anomaliilor fetale. Infectia contractata intr-o perioada avansata a sarcinii este mai frecvent transmisa la fat, dar prezinta un risc mai mic de a induce anomalii  fetale. Cel mai mare risc de boala congenitala severa apare cand infectia este dobandita in saptamanile 10-24 de sarcina, iar cel mai mare risc de transmitere verticala se produce in cursul saptamanilor 26-40. Infectia primara a mamei imediat inaintea conceptiei sau in primele 10 saptamani de sarcina are o rata de transmitere verticala de 2%, dar peste 80% dintre fetusii infectati vor dezvolta o boala severa cu microftalmie, corioretinita, hidrocefalie si  calcificari intracraniene. Intre saptamanile 24 si  30 prevalenta infectiei severe scade de la 80 la 20%, iar dupa saptamana 30 se reduce la 6%, desi peste 80% dintre gravidele care prezinta infectie primara in aceasta perioada vor transmite infectia fatului. Efectuarea testului PCR din lichid amniotic reprezinta cea mai buna metoda de diagnostic a infectiei fetale1. Astfel, la gravidele care prezinta seroconversie in cursul sarcinii studiile au indicat o sensibilitate de 83-97.5% si o specificitate de 100% in detectarea infectiei fetale. Amniocenteza va fi evitata la mamele HIV pozitive datorita riscului de transmitere a virusului la fat. La nou-nascutul cu suspiciune de toxoplasmoza congenitala se pot recolta probe de lichid cefalorahidian, urina sau sange periferic in vederea diagnosticului molecular1;3;10.

Recomandari pentru determinarea Toxoplasma – ADN

  • Toxoplasma – ADN in sange: diagnosticul toxoplasmozei diseminate si al infectiei neonatale5;10.
  • Toxoplasma – ADN in LCR: diagnosticul encefalitei toxoplasmozice la pacienti imunodeprimati sau la nou-nascut5;8;1.
  • Toxoplasma –  ADN in lichid amniotic: diagnosticul infectiei fetale cu T. gondii1;10.
  • Toxoplasma – ADN in lichid ocular (umoare apoasa sau vitroasa): detectarea corioretinitei toxoplasmozice5.

Pregatire pacient – nu este necesara6.

Specimen recoltat – a) sange venos; b) lichid cefalorahidian recoltat prin punctie lombara; c) lichid amniotic; d) umoare apoasa sau vitroasa6.

Recipient de recoltare – a) vacutainer ce contine EDTA ca anticoagulant; b), c), d) recipient steril6.

Cantitate recoltata – a) cat permite vacuumul; b), c) minimum 2 mL; d) minimum 0.1 mL (optim 0.3 mL)6.

Prelucrare necesara dupa recoltare – probele nu vor fi centrifugate6.

Cauze de respingere a probei – a) probe vechi, coagulate, hemolizate; folosirea heparinei ca anticoagulant6.

Stabilitate proba – probele de sange, LCR, lichid amniotic sau ocular sunt stabile 1 saptamana la 2-4°C6.

MetodaPCR cu detectie colorimetrica (test calitativ)6.

Valori de referinta – Toxoplasma gondii – ADN nedetectabil6.

Limita de detectie – 10 copii/mL6.

Interpretarea rezultatelor

Detectia Toxoplasma – ADN in diverse produse patologice sustine diagnosticul clinic de infectie datorata acestui parazit8.

Limite si interferente

Un rezultat negativ nu elimina posibilitatea unei infectii cu Toxoplasma gondii, in special la nivel SNC8.

 

Bibliografie

1. Ann M. Gronowski. Prenatal Screening and Diagnosis of Congenital Infections. In Handbook of Clinical Laboratory Testing During Pregnancy, Humana Press, Totowa, New Jersey, 2004, 273-276.

2. Berrebi, W.E. Kobuch. Toxoplasmosis in pregnancy. In Lancet, 1994, 344, 950.

3. Isabel Fuentes, Mercedes Rodriguez. Urine Sample Used for Congenital Toxoplasmosis Diagnosis by PCR. Journal of Clinical Microbiology. 1996, 34 (10): 2368–2371.

4. J. Lamoril, J-M Molina. Detection by PCR of Toxoplasma gondii in blood in the diagnosis of cerebral toxoplasmosis in patients with AIDS. J Clin Pathol 1996; 49:89-92.

5. Jose G. Montoya, John C. Boothroyd, Joseph A. Kovacs. Toxoplasma gondii. In Mandell, Douglas, and Bennett’s Principles and Practice of Infectious Diseases, 7th edition, Churchill Livingstone, Elsevier, 2010, 3495-3516.

6. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2015. Ref Type: Catalog.

7. Marin Voiculescu. Toxoplasmoza. In Boli infettioase-clinica si epidemiologie, Editura Medicala,1988, 1130-1139.

8. Mayo Clinic. Mayo Medical Laboratories. Test Catalog: Toxoplasma gondii, Molecular Detection, PCR. www.mayomedicallaboratories.com. Ref Type: Internet Communication.

9. Michel Dupon, Jean Cazenave. Detection of Toxoplasma gondii by PCR and Tissue Culture in Cerebrospinal Fluid and Blood of Human Immunodeficiency Virus-Seropositive Patients. Journal of Clinical Microbiology. 1995, 33 (9):2421–2426.

10. Nazan Dalgıc. Congenital Toxoplasma gondii infection. In Marmara Medical Journal 2008; 21(1);089-101.

11. P. Ambroise-Thomas, et al. Le toxoplasme et sa pathologie. Médecine et maladies infectieuses, 1993, 23 spécial, 121-128.

12. Yenisey Alfonso, Jorge Fraga. Molecular diagnosis of Toxoplasma gondii infection in cerebrospinal fluid from AIDS patients. In Cerebrospinal Fluid Research, 2009, 6:2.

< inapoi la lista

Pret 2920.00 MDL