int(0)

Teste de laborator

Pachete de analize medicale

Planșa anatomică

Teste de la A la Z A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z
Teste Laborator
Product categories
Pachete analize Plansa anatomica
< inapoi la lista

Microdeleții braț scurt cromozom Y (SRY) – cariotip și testare FISH

Pret 3330.00 MDL

Нормальный набор хромосом в соматической клетке человеческого вида содержит 46 хромосом, сгруппированных в 22 пары аутосом (1-22) и пару, содержащую половые хромосомы (XX у женщин и XY у мужчин).
Мужская половая принадлежность определяется Y-хромосомой, поэтому в ее присутствии независимо от числа Х-хромосом образуются яички. Доминирующий эффект Y-хромосомы определяется наличием генов на ее коротком плече, в области, называемой TDF (фактор, определяющий семенник) 1; 2. В 1990 году ген SRY (факторы, определяющие пол на Y-хромосоме) был идентифицирован в области TDF, расположенной рядом с псевдоаутосомной областью на коротком плече Y-хромосомы, Yp11.23.
Определение пола у человека контролируется наличием гена SRY, экспрессия которого запускается через 7 недель беременности2.
Ген SRY в Y-хромосоме содержит один экзон и кодирует белок фактора транскрипции (содержащий 204 аминокислоты), член семейства белков HMG (группа высокой подвижности) 3; 4. Он представляет собой «проводник» дифференцировки гонад, воздействуя на недифференцированные эмбриональные гонады, которые он трансформирует в яички, определяя тем самым развитие эмбриона по отношению к мужскому полу. SRY трансформирует мозговое вещество прогонады в яичко, контролирует секрецию тестостерона из клеток Лейдига, регулирует экспрессию AMH (антимюллерианового гормона), гена DSS (дозо-зависимого изменения пола), участвующего в развитии яичников, и гена SOX9 ( SRY – Box9), который направляет процесс организации семенников, из которых будут образовываться семенные канальцы2; 3; 5.
Патологические состояния, включающие изменения в гене SRY5; 6:
1. Синдром Swyer (полный дисгенез гонад) – вызван мутациями в гене SRY.
Мутации в гене SRY были выявлены у 15-20% пациентов с синдромом Swyer. Эти мутации предотвращают образование функционального белка SRY, так что пациент будет фенотипически развиваться как женщина, хотя формула хромосомы 46, XY7.
2. Нарушение полового развития с образованием яичка у пациентов с хромосомной формулой 46, XX.
Чаще всего это состояние возникает из-за ненормального обмена генетическим материалом между X и Y хромосомами (транслокация). Это явление происходит во время отцовского мейоза. Ген SRY больше не будет располагаться на коротком плече Y-хромосомы, а на одной из X-хромосом. Плод, у которого есть X-хромосома с транслоцированным на нем геном SRY, будет фенотипически развиваться как человек, даже если у него нет Y-хромосомы7.
3. Другие состояния, вызванные аномалиями в гене SRY
Мутации в гене SRY, которые влияют, но не отменяют функцию области TDF, были выявлены у пациентов с нарушениями полового развития, такими как частичный дисгенез половых желез. У этих пациентов может быть неоднозначность наружных половых органов или другие аномалии репродуктивной системы8.
Рекомендации по идентификации микроделеций на коротком плече Y-хромосомы
– бесплодие;
– пациенты с синдромом Тернера;
– пациенты с неоднозначностью половых органов7; 8; 9.
Собранный образец – венозная кровь; перед взятием пробы крови пациент подпишет форму информированного согласия10.
Контейнер – вакутейнер, содержащий гепарин натрия в качестве антикоагулянта10.
Количество собранных – 5 мл крови10.
Причины отторжения – уборка по другому типу антикоагулянта; образцы старше 72 часов; тест на коагуляцию10.
Метод работы – классическая методика G-banding и FISH-тестирование гена SRY с использованием зондов Cytocelll9 9; 10.
Тест FISH для определения региона SRY
Зонд для области SRY состоит из 2 непересекающихся последовательностей 30 и 50 кБа соответственно. Эти последовательности охватывают весь ген SRY и области ДНК, которые окружают его. Набор содержит контрольные образцы для центромеры, Y-хромосомы и гетерохроматической области на длинном плече хромосомы.
Тест включает хромосомный анализ крови (кариотип) и тест FISH на ген SRY.
Интерпретация результатов
У нормальных мужчин XY – в анализируемых клетках будут наблюдаться: 1 красный сигнал (SRY), 1 зеленый сигнал (область гетерохроматина на длинном плече Y-хромосомы) и 1 синий сигнал (центральная область X-хромосомы, контроль).
Если происходит удаление гена SRY, в анализируемых клетках будет наблюдаться 1 зеленый сигнал и 1 синий сигнал.
У пациентов с мужским фенотипом, но с хромосомной формулой 46, XX, будут наблюдаться 2 синих сигнала и 1 красный сигнал.
Список используемой литературы
Parker K.L. et al. Генные взаимодействия в развитии гонад, Annu. Rev. Physiol. 1999, 61: 417-433.
Merchant-Larios H, Moreno-Mendoza N. Начало половой дифференциации: диалог между генами и клетками, Arch Med Res. 2001; 32: 553-8.
Бо С, Вивиан Н., Мунстерберг А., Дрессер Д., Ловелл-Бэдж Р., Герье Д., Анализ in vivo регуляции анти-мюллерового гормона, как маркера дифференцировки клеток Сертоли во время развития яичка, показывает многоступенчатый процесс, Мол Репрод Дев. 2001; 59: 256-64.
Хайкова П., Эрхардт С., Лейн Н., Хааф Т., Эль-Маарри О., Рейк В., Уолтер Дж., Сурани М. Эпигенетическое перепрограммирование в первичных половых клетках мыши. Мех дев. 2002; 117:15.
Скаккебек Н.Е., Райперт-Де Мейтс Э., Йоргенсен Н., Карлсен Э., Петерсен П.М., Гиверман А., Андерсен А.Г., Йенсен Т.К., Андерссон А.М., Мюллер Дж. Рак половых клеток и расстройства половых органов наружных сперматогенов: экологическая связь? APMIS. 1998; 106: 3-11.
Queipo G, Zenteno JC, Pena R, Nieto K, Radillo A, Dorantes LM, Erana L, Либерман E, Содерлунд D, Хименес А.Л., Рамон G, Кофман-Альфаро С. Молекулярный анализ в истинном гермафродитизме: демонстрация скрытого низкого уровня мозаицизм для Y-производных последовательностей в 46, XX случаях. Hum Genet. 2002; 111: 278-83.
Связь www.ghr.nlm.nih.gov/condition/swyer-syndrome Тип ссылки: Интернет.
Связь www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1682856 Тип ссылки: Интернет.
Связь www.cytocell.com Тип ссылки: Интернет.
Сыневская лаборатория. Конкретные ссылки на рабочую технологию, использованную в 2014 году. Тип ссылки: Каталог

Informații generale

Setul normal de cromozomi într-o celulă somatică la specia umană conține 46 de cromozomi, grupați în 22 de perechi de autozomi (1-22) și o pereche care conține cromozomii sexuali (XX la sexul feminin și XY la sexul masculin).

Sexualizarea masculină este determinată de cromozomul Y, astfel încât în prezența acestuia, indiferent de numărul de cromozomi X, se formează testicule. Efectul dominant al cromozomului Y este determinat de prezența unor gene pe brațul scurt al acestuia, într-o zonă numită TDF (testis determining factor)1;2. În 1990 a fost identificată în regiunea TDF gena SRY (sex determining factors on the Y chromosome), situată în apropierea regiunii pseudoautozomale de pe brațul scurt al cromozomului Y, Yp11.23.

Determinarea sexului la specia umană este controlată de prezența genei SRY, a cărei expresie este declanșată la 7 săptămâni de gestație2.

Gena SRY aflată pe cromozomul Y, conține un singur exon și codifică o proteină cu rol de factor de transcripție (care conține 204 aminoacizi), membră a familiei de proteine HMG (high mobility group)3;4. Reprezintă “dirijorul” diferențierii gonadale, acționând asupra gonadelor embrionare nediferențiate pe care le transformă în testicule, determinând astfel dezvoltarea embrionului către sexul masculin. SRY transformă medulara progonadei în testicul, controlează secreția de testosteron de la nivelul celulelor Leydig, reglează expresia AMH (hormon antimüllerian), pe cea a genei DSS (dosage – sensitive sex reversal) implicată în dezvoltarea ovariană, precum și pe cea a genei SOX9 (SRY – Box9) care dirijează procesul de organizare a cordoanelor testiculare din care se vor forma tubii seminiferi2;3;5.

Condiții patologice în care sunt implicate modificări ale genei SRY5;6:

1. Sindrom Swyer (disgenezie gonadală completă) – determinat de mutații în gena SRY.

Mutații în gena SRY au fost identificate la 15-20% dintre pacienții cu sindrom Swyer. Aceste mutații împiedică formarea unei proteine SRY funcționale astfel încât pacientul se va dezvolta fenotipic ca femeie, deși formula cromozomială este 46,XY7.

2. Tulburare de dezvoltare sexuală cu formare de testiculi la pacienții cu formulă cromozomială 46,XX.

Cel mai frecvent, această afecțiune apare datorită unui schimb anormal de material genetic între cromozomii X și Y (translocație). Acest fenomen apare în cursul meiozei paterne. Gena SRY nu va mai fi poziționată pe brațul scurt al cromozomului Y ci pe unul dintre cromozomii X. Fetusul care are un cromozom X cu gena SRY translocată pe el se va dezvolta fenotipic ca bărbat, chiar dacă nu are cromozomul Y prezent7.

3. Alte afecțiuni determinate de anomalii ale genei SRY

Mutațiile genei SRY care afectează, dar nu anulează funcția regiunii TDF, au fost identificate la pacienții cu tulburări de dezvoltare sexuală, ca de exemplu – disgenezia gonadală parțială. Acești pacienți pot prezenta ambiguitatea organelor genitale externe sau alte anomalii ale sistemului reproducător8.

Recomandări pentru testul de identificare a microdelețiilor de pe brațul scurt al cromozomului Y

– infertilitate;

– paciente cu sindrom Turner;

– pacienți cu ambiguitatea organelor sexuale7;8;9.

Specimen recoltat – sânge venos; înaintea de recoltarea probei de sânge pacientul va semna formularul de consimțământ informat10.

Recipient – vacutainer ce conține heparină sodică ca anticoagulant10.

Cantitate recoltată – 5 ml de sange10.

Cauze de respingere – recoltarea pe alt tip de anticoagulant; probe mai vechi de 72 ore; probe coagulate10.

Metoda de lucru – tehnică clasică de bandare G și testare FISH pentru gena SRY folosind sonde Cytocelll9;10.

Testul FISH pentru identificarea regiunii SRY

Sonda pentru regiunea SRY este formată din 2 secvențe nesuprapuse de 30 și respectiv 50 kba. Aceste secvențe acoperă întreaga genă SRY și regiunile ADN care o flanchează. Kit-ul conține probe de control pentru centromer, cromozomul Y și pentru regiunea heterocromatică de pe brațul lung al cromozomului Y9;10.

Testul include analiza cromozomială în sânge (cariotip) și testare FISH pentru gena SRY.

Interpretare rezultate

La bărbații normali XY – în celulele analizate se vor observa: 1 semnal roșu (SRY), 1 semnal verde (zona de heterocromatină de pe brațul lung al cromozomului Y) și 1 semnal albastru (zona centromerică a cromozomului X, control).

Dacă există deleția genei SRY, în celulele analizate se vor observa 1 semnal verde și 1 semnal albastru.

La pacienții cu fenotip masculin, dar formulă cromozomială 46,XX se vor observa 2 semnale albastre și 1 semnal rosu.

 

Bibliografie 

  1. Parker K. L. et al. Gene interactions in gonadal development, Annu. Rev. Physiol. 1999, 61: 417-433.
  2. Merchant-Larios H, Moreno-Mendoza N., Onset of sex differentiation: dialog between genes and cells, Arch Med Res. 2001; 32:553-8.
  3. Beau C, Vivian N, Munsterberg A, Dresser DW, Lovell-Badge R, Guerrier D., In vivo analysis of the regulation of the anti-Müllerian hormone, as a marker of Sertoli cell differentiation during testicular development, reveals a multi-step process, Mol Reprod Dev. 2001; 59:256-64.
  4. Hajkova P, Erhardt S, Lane N, Haaf T, El-Maarri O, Reik W, Walter J, Surani M., Epigenetic reprogramming in mouse primordial germ cells. Mech Dev. 2002; 117:15.
  5. Skakkebaek NE, Rajpert-De Meyts E, Jorgensen N, Carlsen E, Petersen PM, Giwercman A, Andersen AG, Jensen TK, Andersson AM, Muller J. Germ cell cancer and disorders of spermatorganes génitaux externesnesis: an environmental connection?. APMIS. 1998; 106:3-11.
  6. Queipo G, Zenteno JC, Pena R, Nieto K, Radillo A, Dorantes LM, Erana L, Lieberman E, Soderlund D, Jimenez AL, Ramon G, Kofman-Alfaro S. Molecular analysis in true hermaphroditism: demonstration of low-level hidden mosaicism for Y-derived sequences in 46,XX cases. Hum Genet. 2002; 111:278-83.
  7. Communication www.ghr.nlm.nih.gov/condition/swyer-syndrome Ref Type: Internet.
  8. Communication www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1682856 Ref Type: Internet.
  9. Communication www.cytocell.com Ref Type: Internet.
  10. Laborator Synevo. Referințe specifice tehnologiei de lucru utilizate 2014. Ref Type: Catalog

 

 

< inapoi la lista

Pret 3330.00 MDL