Page 89 - Ghidul Serviciilor Medicale Synevo, Ediția 2, Volum 1

GHIDUL SERVICIILOR MEDICALE 5
AL LABORATOARELOR SYNEVO METODE DE LUCRU

eluată, fie prin modificarea condiţiilor din coloană (modificarea pH-ului sau concentraţiei saline), fie
prin utilizarea unei alte molecule care va intra în competiţie cu molecula de interes pentru situsurile
de legare ale liganzilor. Exemple de liganzi în funcţie de substanţa de purificat: substrat, inhibitor,
cofactor (pentru enzime), antigene (pentru anticorpi), secvenţe de baze complementare (pentru acizi
nucleici).
Cromatografia de lichide sub înaltă presiune (high-pressure liquid cromatography = HPLC) utilizează
pompe care furnizează presiuni înalte care împing solvenţii prin coloane metalice. Aceasta creşte
viteza procesului de separare şi previne răspândirea soluţiilor care poate apărea în cromatografia
în coloană gravitaţională. Separarea are loc în minute în loc de ore şi este net superioară. Utilizând
cromatografia cu fază inversă pot fi separate două proteine a câte 100 aminoacizi fiecare care diferă
printr-un singur aminoacid.
Cromatografia cu gaz utilizează un lichid cu punct de fierbere înalt impregnat într-un suport solid inert
ca faza solidă şi heliu ca fază mobilă, întregul sistem fiind încălzit. Solutul este injectat în coloană şi se
volatilizează imediat, heliul îndepărtând componentele din coloană, fiecare component fiind înregistrat
de un detector care determină cantitatea relativă a acestuia. Polaritatea şi volatilitatea componentelor
determină timpul cât acestea sunt reţinute de coloană. Capacitatea coloanei în cromatografia cu gaz
fiind foarte mică, aceasta este utilizată în principal ca un instrument analitic.
În cromatografia în strat subţire şi cromatografia cu hârtie coloana este înlocuită cu un strat adsorbant
(silicon, aluminiu, celuloză) aplicat pe un suport de sticlă/plastic/folie de aluminiu. Solutul este aplicat
cu un tub capilar, iar solventul este lăsat să se evapore. Apoi componentele sunt eluate cu un solvent
care este lăsat să urce pe plăcuţă prin acţiune capilară, antrenând componentele amestecului în
grade diferite. În final se aplică un agent oxidant, astfel încât fiecare component apare ca o pată
întunecată pe plăcuţă, localizarea şi mărimea fiecăreia dintre acestea servind pentru identificarea şi
măsurarea cantităţii relative a componentelor . 1

Aplicaţii ale cromatografiei în laboratorul Synevo: dozarea vitaminelor A, B1, B2, B6; determinarea în
urina din 24 ore a acidului vanilmandelic, metanefrinelor, 17-cetosteroizilor, porfirinelor, etc. .
2

Bibliografie

1. John Bernard Henry. Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. 20 edition,
th
2001.
2. Laborator Synevo. Referinţe specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog

89