int(0)

Teste de laborator

Pachete de analize medicale

Planșa anatomică

Teste de la A la Z A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z
Teste Laborator
Product categories
Pachete analize Plansa anatomica
< inapoi la lista

Chlamydia trachomatis ADN + N. gonorrhoeae ADN – urină

Pret 480.00 MDL

Инфекции Chlamydia trachomatis (CT) и Neisseria gonorrheae (GC) являются двумя наиболее распространенными венерическими заболеваниями в мире. Учитывая только Соединенные Штаты, Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) сообщили в 2010 году 1 307 893 новых случаев инфекции Chlamydia trachomatis и 309 341 новых случаев инфекции Neisseria gonorrhoeae1.
Хламидия – это очень маленькая грамотрицательная бактерия, обязательно внутриклеточная из-за того, что она не может синтезировать свою АТФ, будучи культивируемой только в живых эукариотических клетках (яйца с эмбрионами или клеточные культуры).
Последние классификации делят хламидиоз на 4 семейства, из которых наиболее важной в патологии человека является семейство Chlamydiaceae, которое содержит два рода:
• род Chlamydia – наиболее важным представителем является C. trachomatis;
• род Chlamydophila – C. pneumoniae, C. psittaci, C. pecorum, C. abortus и др.
Chlamydia trachomatis встречается почти исключительно у людей. Описано 15 сероваров, вовлеченных в различные инфекции, причем серовары D и K являются основными причинами хламидийной инфекции у женщин и мужчин2;
Для инфекции Chlamydia trachomatis наиболее пораженной возрастной группой является 15-25 лет, распространенность инфекции составляет от 2 до 25%.
Инкубационный период заболевания обычно варьируется от 1 до 3 недель, достигая в некоторых случаях 6 недель. Большая доля инфекций развивается бессимптомно: 75% инфекций у женщин и 50% инфекций у мужчин. В симптоматических случаях уретрит и проктит могут встречаться у мужчин в острой фазе; При отсутствии лечения может возникнуть хронический эпидидимит, простатит и реактивный артрит. Клинические проявления у женщин состоят из уретрита, цервицита и бартолинита, которые могут осложняться: эндометритом, сальпингитом, пельвиперитонитом, перигепатитом и реактивным артритом.
Бессимптомная природа многих инфекций Chlamydia trachomatis ответственна за их недиагностику с важными последствиями, особенно у женщин, из-за доказанной корреляции между нелеченной инфекцией и осложнениями, такими как внематочная беременность и бесплодие.
Будучи венерическим заболеванием, оценка партнеров обязательна для предотвращения повторных инфекций.
Как и в случае других венерических заболеваний, инфекция Chlamydia trachomatis может способствовать передаче ВИЧ-инфекции. Кроме того, новорожденные могут заразиться при прохождении через цервикальный канал и развить конъюнктивит, фарингит и пневмонию4;
Лабораторная диагностика инфекций Chlamydia trachomatis включает в себя выделение возбудителя в клеточных культурах, обнаружение антигена методами прямой иммунофлуоресценции (DFA) или иммуноферментными методами, а также определение бактериального генетического материала с помощью молекулярных методов. Поскольку клеточные культуры трудоемки и требуют много времени, они не используются регулярно, что является прерогативой специальных лабораторий. Более того, согласно литературным данным, разработка технологий амплификации нуклеиновых кислот (NAAT) значительно улучшила клиническую чувствительность обнаружения КТ, так что выделение этого патогена в клеточных культурах больше не считается методом «золотого стандарта».
В настоящее время в США большинство программ скрининга и лабораторных испытаний основаны на этой технологии4;
Neisseria gonorrhoeae, грамотрицательный диплококк, является этиологическим агентом гонореи, одного из наиболее распространенных венерических заболеваний.
У мужчин инфекция в большинстве случаев симптоматическая и связана с передним уретритом, сопровождающимся гнойной секрецией. Инкубационный период составляет 1-10 дней. У женщин основным местом заражения является эндоцервикс. Это описывает увеличенную распространенность сопутствующих инфекций с Chlamydia trachomatis и Trichomonas vaginalis, а также связь с бактериальным вагинозом. Многие женщины остаются бессимптомными и поэтому не обращаются к врачу. Когда появляются клинические проявления, они представлены измененными выделениями из влагалища, дизурией, диспареунией, межменструальным кровотечением. Другими возможными локализациями гонококковой инфекции являются прямая кишка, глотка, конъюнктива; Распространенные инфекции могут возникать редко. Дети, рожденные от инфицированных матерей, могут иметь конъюнктивит.
При отсутствии адекватного лечения антибиотиками могут развиться острые или поздние осложнения, такие как: эпидидимит или простатит у мужчин; воспалительные заболевания органов малого таза, перигепатит, бесплодие, внематочная беременность у женщин4;
N. gonorrhoeae – это лабильный микроб, который не выживает в образцах, которые собираются вне лаборатории. По этой причине микробиологическая диагностика на основе культуры в этих случаях имеет низкое значение. Как и в случае с КТ-инфекциями, разработка технологий NAAT позволила улучшить обнаружение гонококковых инфекций, и эти методы, очевидно, имеют ряд преимуществ по сравнению с классическими методами культивирования:
• поскольку бактериальная ДНК обнаружена, микроорганизму не обязательно быть жизнеспособным;
• имеет более высокую чувствительность;
• у мужчин тест может быть выполнен с мочой, что повышает соблюдение пациентом режима исследования7.
В качестве заключения к вышеупомянутым Chlamydia trachomatis (CT) и Neisseria gonorrhoeae (GC) являются патогенами, наиболее часто вовлеченными в венерические заболевания, вызываемые бактериями. Важно отметить, что ко-инфекция CT-GC регистрируется примерно в 30% случаев (чаще у женщин), следовательно, необходимо комбинированное тестирование двух патогенов.
Ранняя диагностика инфекций является сложной задачей, потому что у значительной части пораженных людей нет никаких симптомов. При отсутствии диагноза и лечения они могут привести к диссеминированным инфекциям у мужчин и воспалительным заболеваниям таза у женщин со значительными поздними последствиями: бесплодие, внематочная беременность, хроническая тазовая боль5; 8. При обеих инфекциях возможна перинатальная передача при развитии конъюнктивита у новорожденного. КТ и ГК также связаны с повышенным риском передачи ВИЧ. Одним из лучших способов предотвращения осложнений КТ и ГК-инфекций является обследование подростков и молодых людей, а также беременных женщин. Если у человека диагностирована одна или обе инфекции, все сексуальные партнеры должны пройти тестирование и пройти соответствующее лечение.
Руководства CDC (Центры по контролю и профилактике заболеваний) рекомендуют проводить скрининг с помощью тестов амплификации нуклеиновых кислот с высокой чувствительностью и специфичностью, подтверждая, что молекулярные методы в настоящее время являются диагностическим стандартом для инфекций CT и GC4.
Доступные в настоящее время методы, основанные на технологии NAAT, включают полимеразную цепную реакцию (ПЦР), CSF (лигазная цепная реакция), CSA (амплификация смещения цепей) и TMA (транскрипционно-опосредованная амплификация) 8. Растущее использование технологии NAAT для обнаружения КТ и НГ показало, что, как уже упоминалось выше, многие половые инфекции протекают бессимптомно9.
В нашей лаборатории мы используем автоматизированный метод ТМА, который, в отличие от других упомянутых методов, основанных на амплификации бактериальной ДНК, усиливает рибосомную РНК (рРНК). Тест APTIMA COMBO 2 позволяет одновременно качественно определять КТ и ГХ, а также предлагает новый молекулярный подход, комбинируя технологии «захват цели», TMA («Транскрипционно-опосредованное усиление») и DKA («Двойной кинетический анализ»). Основным преимуществом этого метода по сравнению с другими методами NAAT является то, что он нацелен на молекулы рРНК, которые присутствуют в клетках в большем количестве по сравнению с молекулами ДНК, что приводит к повышению чувствительности, что снижает риск ложноотрицательные результаты.
Принцип метода:
Тест включает в себя 3 этапа:
-Захватить цель
– усиление
-обнаружение
Образцы собираются и переносятся в соответствующие транспортные пробирки. Растворы в этих пробирках высвобождают молекулы рРНК и защищают их от деградации во время хранения.
Захват рРНК – молекулы-мишени – осуществляется с помощью захвата олигонуклеотидов, которые связываются с другими нуклеотидами, присутствующими на поверхности магнитных микрочастиц. Захватывающие олигомеры используют последовательности, комплементарные определенным участкам молекулы-мишени, которые присоединяются к ним во время стадии гибридизации. Образованные таким образом комплексы магнитно разделяют и несколько раз промывают для удаления веществ, которые могут мешать или ингибировать последующую реакцию амплификации, таким образом снижая риск ложноотрицательных результатов.
Реакция амплификации основана на способности комплементарных праймеров (олигонуклеотидов) специфически связываться и облегчать ферментативную амплификацию. Анализ APTIMA позволяет реплицировать специфическую последовательность из 23S-области рРНК для CT и 16S для GC. Для каждой молекулы-мишени используется уникальный набор праймеров. В реакции TMA используются два фермента – РНК-полимераза и обратная транскриптаза – амплификация проводится в изотермических условиях, в отличие от методов ПЦР. На первой стадии процесса ТМА промоторный праймер гибридизуется с рибосомной РНК-мишенью. Обратная транскриптаза распознает эту последовательность промотора праймера и создает ДНК-копию РНК-мишени (кДНК, комплементарная ДНК). Последовательность РНК в гибриде ДНК: РНК будет затем удалена активностью обратной транскриптазы РНКазы H. Второй праймер связывается с молекулой кДНК, и обратная транскриптаза синтезирует новую цепь ДНК, в результате чего образуется двухцепочечная молекула ДНК.
РНК-полимераза распознает промоторную последовательность в цепи ДНК и инициирует транскрипцию (процесс образования РНК в ДНК). Весь этот процесс повторяется, образуя миллионы РНК-ампликонов всего за 60 минут.
Третий этап – обнаружение ампликонов. После амплификации в реакцию вводят ДНК-зонд, меченный эфирами акридиния. Если ампликон-мишень присутствует, зонд гибридизуется и образуется стабильный комплекс зонд-ампликон. Затем добавляется реагент для отбора, который удаляет несвязанные молекулы акридиния. Следующим этапом является гидролиз молекул эфира акридиния, связанных с ампликон-зондовыми комплексами, и получение светового сигнала. На этапе обнаружения свет, испускаемый этими гибридами, измеряется люминометром в виде фотонных сигналов и сообщается в RLU (относительные световые единицы).
Для каждой из двух мишеней рРНК будет использоваться ДНК-зонд, меченный различными эфирами акридиума. Благодаря технологии DKA различия между кинетическими профилями зондов CT и GC позволяют различать сигнал, обнаруженный хемилюминесценцией. Результаты испытаний устанавливаются с использованием отсечки на основе общего значения RLU и типа обнаруженной кинетической кривой6.
Характеристики и преимущества теста APTIMA Combo 2
Рабочие характеристики теста APTIMA Combo 2 были установлены после многоцентрового исследования, проведенного в Северной Америке, которое включало 2932 пробы мочи и генитальные пробы, собранные на тампоне у лиц с симптомами и без симптомов (1569 женщин и 1363 мужчины).
В случае образцов, собранных на эндоцервикальном буфере, сообщалось следующее:
Для КТ: чувствительность 94,2%, специфичность 97,6%
Для ГХ: чувствительность 99,2%, специфичность 99,6%
и при использовании образцов мочи у мужчин:
Для КТ: чувствительность 97,9%, специфичность 98,5%
Для ГХ: чувствительность 98,5%, специфичность 99,6 %6.
Метод TMA обладает самой высокой чувствительностью из всех методов, основанных на технологии NAAT, и способен обнаруживать очень небольшое количество нуклеиновых кислот в образце. Чувствительность теста APTIMA Combo 2, проведенного на большом количестве образцов (1304 пробы мочи и генитальных проб, собранных на тампоне), оказалась явно выше чувствительности определения культуры клеток или метода DFA9. Это также единственная методика, в которой было показано, что чувствительность теста мочи эквивалентна чувствительности теста, проведенного на пробе мазка10.
Метод идентификации CT / GC, запатентованный компанией GenProbe (США), позволяет на первом этапе захватывать рибосомные молекулы РНК с помощью магнитных шариков, затем их усиление и обнаружение полученного сигнала, используя технику DKA, которая включает другая кинетика испускания и захвата света соответственно. Весь процесс, который происходит после ввода первичной трубки в анализатор, выполняется полностью автоматически, что позволяет избежать возможного загрязнения или ошибок, вносимых пользователем. Из-за этапов промывки, включенных в начале аналитического процесса, возможность получения ложноотрицательных результатов из-за ингибиторов или мешающих факторов (хорионический гонадотропин человека, кристаллы, нитриты, гемоглобин) практически исключена. Кроме того, этот метод устраняет перекрестную реактивность с другими микроорганизмами, которые могут присутствовать в мочеполовом тракте в качестве возможной потери бактериальной ДНК во время процесса экстракции, что может повлиять на реакцию амплификации и привести к ложноотрицательным результатам9.
Эффективность теста APTIMA Combo 2 была также подтверждена для обнаружения мутантных штаммов Chlamydia trachomatis, результаты подтверждают, что тест способен идентифицировать вариант шведского СТ, который имеет делецию в загадочной плазмиде, и что некоторые коммерческие тесты не обнаруживают11.
Все эти данные подтверждают точность теста APTIMA Combo 2 и рекламируют его как элитный тест в молекулярной диагностике.
В нашей лаборатории в качестве пробы у женщин используются образцы эндоцервикального тампона, а у мужчин – первая струя мочи. Как упоминалось выше, тестирование образцов мочи имеет очень хорошую чувствительность и специфичность, что представляет собой неинвазивную альтернативу анализу образцов уретры6.
Рекомендации по определению Chlamydia trachomatis – диагностика острых урогенитальных инфекций, скрининг инфекций у лиц высокого риска; скрининг беременных женщин в первом триместре беременности (для беременных женщин ≤ 25 лет и для лиц с высоким риском развития инфекций КТ и НГ тест будет повторен в третьем триместре; в случае беременных женщин, которые получили положительный результат в первом триместре беременности) будет повторяться через 3-6 месяцев) 4; 7.
Взятые образцы – образцы будут взяты из мочеполовой системы: эндоцервикальный мазок для женщин и первая реактивная моча для мужчин; для женщин будут использоваться тампоны, включенные в системы сбора, предоставляемые лабораторией (см. рисунок 1).
Коллекция эндоцервикальных проб
Перед фактическим сбором избыток слизи будет удален из отверстия шеи с помощью тампона из белой палочки, включенного в набор (APTIMA CLEANING SWAB); затем вставьте другой тампон с синим стержнем (APTIMA COLLECTION SWAB) в цервикальный канал, осторожно поверните 5 раз в одном направлении (10-30 секунд), затем слегка втяните, избегайте контакта со слизистой влагалища и будет вставлен в транспортную трубку; тампон сломается около отметки, так что только конец тампона останется в транспортной трубке, плотно прилегающей к крышке. Трубка будет надлежащим образом маркирована и отправлена ​​в лабораторию. Не прикасайтесь к крышке алюминиевой фольги трубки.
Каждый образец будет упакован отдельно в специальные оранжевые пакеты.
Сбор образцов мочи
До фактического сбора пациент не должен мочиться не менее 1 часа; затем его собирают в одноразовый контейнер с плотно прилегающей крышкой (например, 24-часовой писсуар, предоставленный лабораторией) примерно в 20-30 мл первого потока мочи.
В течение 24 часов после сбора приблизительно 2 мл образца мочи, собранного пациентом, будет перенесено в транспортную трубку на изображении ниже. До тех пор образец будет храниться при 2-30ºC.
Перенос образца в транспортную пробирку будет выполняться в лаборатории с использованием пластиковой пипетки из набора. Если образцы не могут добраться до лаборатории в течение 24 часов, сотрудники Synevo запросят транспортные пробирки, чтобы перенести образцы в соответствующие места.
Для обеспечения правильного объема мочи уровень жидкости должен находиться между двумя черными линиями, отмеченными стрелками на этикетке пробирки. Трубка будет запечатана и правильно маркирована. Для хорошей гомогенизации мочи со стабилизирующей средой в пробирке, 5 инверсионных движений пробирки будут выполнены, не касаясь крышки алюминиевой фольги пробирки.
Каждый образец будет упакован отдельно в специальные оранжевые пакеты.
Стабильность образца – 2 месяца при температуре 2-30ºC для эндоцервикальных образцов и для стабилизированных образцов мочи (переносится в пробирку) 6.
Метод – ТМА (транскрипционно-опосредованная амплификация); используются следующие типы контролей: положительный контроль CT / отрицательный контроль GC и положительный контроль GC / отрицательный контроль CT6.
Пределы обнаружения
Коннектикут
Сообщается об аналитической чувствительности 1 IFU / тест (7,25 IFU / буфер и 5 IFU / мл мочи). Тем не менее, исследования показали 100% позитивность при разведениях КТ <1 IFU / тест.
IFU = учебные блоки включения
NG:
Сообщается об аналитической чувствительности 50 клеток / тест (362 клеток / буфер и 250 клеток / мл мочи)
Тем не менее, исследования показали 100% позитивность при разведениях GC <50 клеток / тест6.
Справочные значения и отчетность о результатах
РРНК Chlamydia trachomatis (CT) не обнаруживается.
Neisseria gonorrhoeae (NG) не обнаруживаемая рРНК.
Результаты представлены как необнаружимые / положительные / двусмысленные. В случае двусмысленного результата, тест проводится повторно; если получен сомнительный результат, рекомендуется повторить сбор образцов.
Можно получить неверный результат, который указывает на ошибку в аналитическом процессе, которая необходима для повторного тестирования образца или, в некоторых случаях, для повторного сбора урожая.
Интерпретация результатов, ограничений и вмешательств
Неопределяемый результат указывает на то, что CT и / или G рРНК не присутствует в тестируемом образце; однако наличие инфекции не исключается, поскольку частота выявления зависит от сбора образца, количества рибосомальной РНК в образце, отсутствия ингибиторов или стадии инфекции.
Положительный результат указывает на то, что рРНК для КТ и / или ГХ присутствует в тестируемом образце и является сильным показателем инфекции.
Однако положительная прогностическая ценность теста зависит от распространенности инфекции в определенной популяции или группе. Таким образом, в группах с высокой распространенностью венерических заболеваний положительная прогностическая ценность возрастает. Напротив, в группах с низкой распространенностью этих категорий инфекций положительные результаты следует тщательно интерпретировать в общем клиническом контексте пациента, принимая во внимание возможность повторного тестирования другими методами (например, культура для Neisseria gonorrheae).
Присутствие слизи в эндоцервикальных образцах не влияет на обнаружение CT и GC в тесте APTIMA Combo 2, но рекомендуется удалить избыток слизи, чтобы в образце было достаточное количество CT-инфицированных эндоцервикальных клеток. Кроме того, наличие крови не влияет на эффективность теста, если только он не обнаружен в процентах, превышающих 10% (об. / Об.) В образцах эндоцервикала и более 30% (об. / Об.) В образцах мочи.
Никакого вмешательства со смазками или спермицидами не наблюдалось для эндоцервикальных тампонов. Кроме того, образцы мочи не влияли на присутствие витаминов и минералов.
Производительность, установленная для образцов мочи, основана на тестировании первого потока мочи. Для других типов образцов мочи эффективность не оценивалась.
Тест также обнаруживает не содержащие плазмиды варианты C. trachomatis.
Никаких перекрестных реакций с непатогенными видами Neisseria, присутствующими в ротоглотке, для GC обнаружено не было.
В целом, тест не рекомендуется для оценки эффективности лечения антибиотиками, поскольку нуклеиновые кислоты в этих возбудителях могут сохраняться в течение не менее 3 недель после окончания терапии. По истечении этого периода повторное тестирование полезно для беременных женщин, когда подозревается несоблюдение режима лечения или повторное заражение и в тех случаях, когда симптомы сохраняются.
Список используемой литературы
1. Центры по контролю и профилактике заболеваний. 2011. Эпиднадзор за болезнями, передаваемыми половым путем. 2010. Атланта, Джорджия: США. Департамент здравоохранения и социальных служб.
2. Бетти А. Форбс, Даниэль С. Сам, Алиса С. Вайсфельд – Обязательные внутриклеточные и некультурабильные бактериальные агенты. Диагностическая микробиология Бейли и Скотта, 12 изд., 2007, 510-524.
3. Ричард А. МакПетерсен, Мэтью Р. Пинкус. Хламидийные, риккетсиозные и микоплазменные инфекции. В Генри Клиническая диагностика и управление лабораторными методами – Sauders Elsevier 21-Ed 2007 – стр. 1002, 1003.
4. Центры по контролю и профилактике заболеваний, «Рекомендации по лечению венерических заболеваний 2010», MMWR Recomm Rep, 2010, том 59 (RR12): 1-116.
5. Бернард М. Карнатх. Проявления гонореи и хламидийных инфекций. В больнице врач май / июнь 2009 г. www.turner-white.com.
6. Сыневская лаборатория. Конкретные ссылки на используемую технологию работы 2014 года. Тип ссылки: Каталог.
7. Джонсон Р.Э., Ньюхолл В.Дж., Папп Дж.Р. и др. «Скрининговые тесты для выявления Chlamydia trachomatis и Neisseria gonorrhoeae», MMWR Recomm Rep, 2002, 51 (RR15): 1-38.
8. Специализированные лаборатории. Chlamydia trachomatis и Neisseria gonorrhoeae для пациентов с симптомами и без симптомов. www.specialtylabs.com. Тип ссылки: Интернет-связь.
9. Б. Бояджян, Т. Яшина, Дж. Х. Ятабэ, М. Патнаик, С. С. Хилл. Сравнение анализов APTIMA CT и GC с анализом APTIMA Combo 2, анализом Abbott LCx и прямым анализом флуоресцентных антител и культур для выявления Chlamydia trachomatis и Neisseria gonorrhoeae. В журнале клинической микробиологии, июль 2004 г., том 42, № 7, 3089–93.
10. Crotchfelt, К. A., B. Pare, C. Gaydos, T. C. Quinn. Обнаружение Chlamydia trachomatis с помощью Gen-Probe AMPLIFIED Chlamydia Trachomatis (AMP CT) в образцах мочи от мужчин и женщин и эндоцервикальных образцах от женщин. J. Clin. Microbiol. 1998; 36: 391-394.
11. Мёллер Дж. К., Педерсен Л. Н., Перссон К. Сравнение транскрипционно-опосредованной амплификации Gen-Probe, ПЦР Abbott и ПЦР Roche для выявления штаммов дикого типа и мутантных плазмид Chlamydia trachomatis в Швеции. J Clin Microbiol. Декабрь 2008 г .; 46 (12): 3892–3895.
12. Клиника Майо, Медицинские лаборатории Майо. Справочные лабораторные службы для организаций здравоохранения. Chlamydia trachomatis и Neisseria gonorrhoeae путем амплификации нуклеиновых кислот (GEN-PROBE). www.mayomedicallaboratories.com. 2014. Тип ссылки: Интернет-связь.

 

SKU: BM184

Informații generale

 Infecțiile cu Chlamydia trachomatis (CT) și Neisseria gonorrheae (GC) sunt două din cele mai frecvente boli cu transmitere sexuală din lume. Luând în considerare doar Statele Unite ale Americii, Centers for Disease Control and Prevention (CDC) a raportat în 2013 1,401,906 cazuri noi de infecție cu Chlamydia trachomatis și 820,000 cazuri noi de infecție cu Neisseria gonorrhoeae3

Chlamydia este o bacterie Gram negativă de dimensiuni foarte mici, obligatoriu intracelulară datorită faptului că nu îşi poate sintetiza ATP-ul, fiind cultivabilă doar în celulele vii eucariote (ouă embrionate sau culturi celulare).

Clasificări recente împart Chlamydiile în 4 familii, dintre care cea mai importantă în patologia umană este familia Chlamydiaceae, care conţine două genuri:

  • genul Chlamydia – cel mai important reprezentant fiind C. trachomatis;
  • genul Chlamydophila – C. pneumoniae, C. psittaci, C. pecorum, C. abortus, etc.
Chlamydia trachomatis este întâlnită aproape în exclusivitate la om. Sunt descrise 15 serovaruri implicate în diverse infecţii1;2.
Infecţia cu Chlamydia trachomatis este cea mai frecventă boală cu transmitere sexuală de cauză bacteriană. Grupa de vârstă cea mai afectată este 15-25 ani, prevalenţa infecţiei fiind între 2 şi 25%.

Perioada de incubaţie a bolii variază în general între 1 şi 3 săptămâni, ajungând în unele cazuri la 6 săptămâni. O mare parte a infecţiilor evoluează asimptomatic: 75% din infecţiile la femei şi 50% din infecţiile la bărbaţi. În cazurile simptomatice la bărbat pot apărea uretrită şi proctită în faza acută; în lipsa tratamentului se poate instala cronicizarea cu epididimită, prostatită şi artrită reactivă. Simptomele clinice la femeie constau în uretrită, cervicită şi bartolinită care se pot complica cu: endometrită, salpingită, pelviperitonită, perihepatită precum şi artrită reactivă.

Caracterul asimptomatic al multor infecţii cu Chlamydia trachomatis este responsabil de subdiagnosticarea acestora, cu importante consecinţe mai ales la femei datorită corelaţiei dovedite între infecţia netratată şi complicaţii cum ar fi sarcina ectopică şi infertilitatea.

Fiind o boală cu transmitere sexuală evaluarea partenerilor este obligatorie pentru a preveni reinfecţiile.

Ca şi în cazul altor boli cu transmitere sexuală infecţia cu Chlamydia trachomatis poate facilita transmiterea infecţiei HIV. În plus, nou-născuţii se pot infecta la trecerea prin canalul cervical şi pot dezvolta conjunctivită, faringită şi pneumonie3;4;5.

Diagnosticul infecţiilor cu Chlamydia trachomatis include izolarea agentului patogen în culturi celulare, depistarea antigenului prin metode imunologice şi determinarea ADN-ului prin tehnici moleculare. Deoarece culturile celulare sunt laborioase şi necesită timp nu se folosesc de rutină fiind apanajul unor laboratoare speciale3;5

Numeroasele studii au indicat că tehnicile de amplificare ADN detectează cu aproximativ 15% mai multe înfecţii comparativ cu celelalte metode care nu se bazează pe culturi celulare, cu o specificitate >99%. În plus, testul ADN poate utiliza probe care nu sunt compatibile cu metodele bazate pe culturi cum ar fi cele de urină la bărbaţi6.

Pe lângă ADN-ul cromozomial C. trachomatis conţine o plasmidă criptică care este comună tuturor serovarurilor. Din acest motiv, testele moleculare au drept ţintă secvenţe nucleotidice de la nivelul acestei plasmide. În 2006 a fost descrisă pentru prima dată varianta suedeză de Chlamydia trachomatis ce prezintă prezintă o deleţie de 377 bp în interiorul plasmidei ADN şi care nu este detectată de unele teste comerciale5.

Neisseria gonorrhoeae, un diplococ Gram negativ, este agentul etiologic al gonoreei, una din cele mai frecvente boli cu transmitere sexuală.

La bărbaţi infecţia este în cele mai multe cazuri simptomatică, fiind asociată cu uretrită anterioară însoţită de secreţie purulentă. Perioada de incubaţie este de 1-10 zile. La femei principala localizare a infecţiei este endocervixul. Se descrie o prevalenţă crescută a coinfecţiilor cu Chlamydia trachomatis şi Trichomonas vaginalis precum şi asocierea cu vaginoza bacteriană. Multe dintre femei rămân asimptomatice şi din acest motiv nu se prezintă la medic. Atunci când apar manifestările clinice acestea sunt reprezentate de secreţii vaginale modificate, disurie, dispareunie, sângerări intermenstruale. Alte posibile localizări ale infecţiei gonococice sunt rectul, faringele, conjunctiva; rareori se pot produce infecţii diseminate. Copiii născuţi din mame infectate pot prezenta conjunctivită.

În absenţa tratamentului antibiotic adecvat se pot dezvolta complicaţii acute sau tardive, cum ar fi: epididimită sau prostatită la bărbaţi; boală inflamatorie pelvină, perihepatită, infertilitate, sarcini ectopice la femei3;4;5.

  1. gonorrhoeae este un germene labil care nu supravieţuieşte în probele ce sunt recoltate în afara laboratorului. Din acest motiv, diagnosticul microbiologic bazat pe cultură are valoare scăzută în aceste cazuri.

Dezvoltarea tehnicilor de amplificare a acizilor nucleici a îmbunătăţit depistarea infecţiilor cu gonoc, aceste tehnici prezentând în mod evident o serie de avantaje în comparaţie cu metodele clasice de cultivare:

  • deoarece este detectat ADN-ul bacterian nu este necesar ca microorganismul să fie viabil;
  • prezintă o sensibilitate mai mare;
  • la bărbaţi testul poate fi efectuat din urină, ceea ce creşte complianţa pacienţilor la investigaţie6.

Ca o concluzie la cele menţionate mai sus Chlamydia trachomatis (CT) şi Neisseria gonorrhoeae (GC) sunt agenţii patogeni cel mai frecvent implicaţi în bolilele cu transmitere sexuală de cauză bacteriană. Foarte important,  coinfecţia CT-GC este raportată în aproximativ 30% din cazuri (mai frecvent la femei) de unde şi necesitatea testării combinate a celor doi patogeni.

Diagnosticul precoce al infecţiilor constituie o provocare deoarece o mare parte din persoanele afectate nu prezintă simptome. În absenţa diagnosticului şi tratamentului pot conduce la infecţii diseminate la bărbaţi şi la boală inflamatorie pelvină la femei cu consecinţe tardive semnificative: infertilitate, sarcină ectopică, durere pelvină cronică4;7.

În cazul ambelor infecţii este posibilă transmiterea perinatală cu dezvoltarea conjunctivitei la nou-născut. De asemenea, CT şi GC se asociază cu risc crescut de transmitere a infecţiei HIV7.

Una din cele mai bune metode de a preveni complicaţiile infecţiilor CT şi GC este screening-ul adolescenţilor şi adulţilor tineri precum şi a femeilor gravide. Dacă o persoană este diagnosticată cu una sau ambele infecţii toţi partenerii sexuali trebuie testaţi şi trataţi corespunzător4.

Ghidul CDC (Centers for Disease Control and Prevention) recomandă ca screening-ul să se efectueze cu teste de amplificare a acizilor nucleici cu sensibilitate şi specificitate înaltă, confirmând faptul că metodele moleculare constituie în prezent standardul de diagnostic al infecţiilor CT şi GC3.

În laboratorul nostru se utilizează o metodă real-time PCR complet automatizată a cărei performanţă a fost recent evaluată în câteva studii. Acestea au indicat faptul că testul are o sensibilitate şi specificitate foarte bune pentru detecţia calitativă a ADN-ului CT şi NG în probe urogenitale, dovedind în acelaşi timp şi o eficienţă înaltă:

  • pentru CT: sensibilitate de 6-98%, specificitate de ≥99.6%;
  • pentru GC: sensibilitate de 9-100%, specificitate de ≥99.8%8;9.

Din punct de vedere tehnic testul are la bază amplificarea a două secvenţe ADN ţintă pentru fiecare din cei doi agenţi patogeni în scopul reducerii numărului de rezultate fals-negative şi fals-pozitive. Astfel,  în cazul CT sunt utilizaţi primeri şi sonde specifice pentru o secvenţă de aproximativ 206 nucleotide din plasmida criptică precum şi pentru o secvenţă de cca 182 nucleotide din cadrul ADN-ului cromozomial (gena ompA care codifică proteina majoră a membranei externe). Pentru NG se folosesc primeri şi sonde care ţintesc atât o secvenţă de aproximativ 190 nucleotide din regiunea repetitivă directă înalt conservată  denumită DR-9 cât şi o secvenţă de ~ 215 nucleotide identificată drept o variantă de secvenţă conservată din această regiune. În plus, este introdus în fiecare probă un control intern CT/NG reprezentat de o combinaţie de două plasmide ADN neinfecţioase care monitorizează toate etapele  reacţiei PCR.

În ceea ce priveşte performanţa analitică, testul este capabil să identifice alături de cele 14 serovaruri şi varianta suedeză de CT; în cazul NG nu există reacţii încrucişate cu bacteriile Neisseria cinereaflava, lactamica, perflava, subflava raportate la alte teste moleculare5;8.

Ca tip de probe sunt utilizate tamponul endocervical la femei şi urina primul jet la bărbaţi. Menţionăm că în cazul bărbaţilor testarea probelor de urină prezintă o sensibilitate şi specificitate foarte bune reprezentând o alternativă non-invazivă la analiza probelor uretrale10.

Recomandări pentru determinarea Chlamydia trachomatis ADN – diagnosticul infecţiilor acute urogenitale, screening-ul infecţiei la persoanele cu risc crescut; screening-ul gravidelor în primul trimestru de sarcină (pentru gravidele ≤ 25 ani cât şi pentru cele cu risc crescut de infecţii CT şi NG testarea va fi repetată şi în trimestrul III; în cazul gravidelor la care s-a obţinut un rezultat pozitiv în trimestrul I testarea va fi repetată după 3-6 luni)3;6.

Specimen recoltat – se vor recolta probe provenite din tractul urogenital: tampon endocervical pentru femei şi urină primul jet pentru bărbaţi;

Recoltarea probei de urină

Înainte de recoltarea propriu-zisă pacientul nu trebuie să urineze timp de cel puţin 1 oră; apoi se recoltează într-un recipient de unică folosinţă prevăzut cu un capac etanş (de exemplu, paharul pentru urină din 24 ore furnizat de laborator)  aproximativ 10-20 mL din primul jet de urină.

În decurs de 24 ore de la recoltare proba de urină trebuie transferată în tubul de transport din fig.2. Până atunci proba va fi menţinută la 2-30ºC.

Transferul probei în tubul transport va fi efectuat la sediul laboratorului utilizând pipeta de plastic din kit. În cazul în care probele nu pot ajunge în laborator în decurs de 24 ore colaboratorii Synevo vor solicita tuburi de transport în vederea transferării probelor în locaţiile respective.

Pentru a se asigura un volum corect de urină nivelul lichidului trebuie să se situeze între cele două linii negre marcate cu săgeţi pe eticheta tubului. Tubul va fi închis etanş şi etichetat corespunzător. Pentru o bună omogenizare a urinei cu mediul stabilizator din tub se vor efectua 5 mişcări de inversiune a tubului5.

Chlamydia trachomatis ADN + Neisseria gonorrhoeae ADN, sistem de recoltare probe de urina

Fig. 2: Sistem de transfer al probelor de urină

Stabilitate probă – 3 luni la temperaturi de 2-30ºC pentru probele endocervicale şi pentru probele de urină stabilizate (transferate în tub)5.

Metodă – Real-time PCR; sunt folosite următoarele tipuri de controale: control intern CT/NG, control negativ şi control pozitiv3.

Valori de referinţă

Chlamydia trachomatis (CT) ADN nedetectabil.

Neisseria gonorrhoeae (NG) ADN nedetectabil

Un rezultat invalid indică o eroare de amplificare a acizilor nucleici fiind necesară retestarea probei sau în unele cazuri, repetarea recoltării5.

Limite şi interferenţe

Un rezultat nedetectabil nu exclude prezenţa unei infecţii deoarece rata de detecţie depinde de calitatea probei recoltate, numărul de microorganisme prezente în probă, stadiul infecţiei precum şi de tulpinile CT/NG infectante.

Prezenţa mucusului în probele endocervicale poate inhiba reacţia PCR. De asemenea prezenţa sângelui într-un procent mai mare de 5% (v/v) în probele endocervicale şi mai mare de 0.35% (v/v) în probele de urină transferate poate conduce la rezultate invalide sau fals-negative.

Valoarea predictivă a testului este influenţată de prevalenţa infecţiei într-o anumită populaţie sau grup. Astfel, în grupurile cu prevalenţă crescută a bolilor cu transmitere sexuală valoarea predictivă pozitivă este crescută. În schimb în grupurile cu prevalenţă scăzută a acestor categorii de infecţii rezultatele pozitive trebuie să fie atent interpretate în contextul clinic general al pacientului, luând în considerare şi posibilitatea existenţei unor rezultate fals pozitive.

Performanţa stabilită pentru probele de urină se bazează pe testarea primului jet de urină. Pentru alte tipuri de probe de urină performanţa nu a fost evaluată.

Testul nu detectează variantele de C. trachomatis lipsite de plasmide însă acestea sunt rar întâlnite în infecţiile genitale.

În general, testul nu se recomandă pentru aprecierea eficienţei tratamentului antibiotic deoarece acizii nucleici din aceşti patogeni pot persista cel puţin 3 săptămâni după încheierea terapiei. După această perioadă de timp retestarea este utilă în cazul gravidelor, atunci când se suspectează o lipsă de complianţă la tratament sau o reinfecţie şi în cazurile în care simptomatologia persistă.

Testul nu va fi folosit în practica medico-legală (în cazurile de abuz sexual), cultura celulară fiind singura metodă acceptată în aceste situaţii5.

Bibliografie

  1. Betty A. Forbes, Daniel S. Sahm, Alice S. Weissfeld – Obligate Intracellular and Nonculturabile Bacterial Agents. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology, 12th ed., 2007, 510-524.
  2. Richard A. McPetersen, Matthew R. Pincus. Chlamydial, Rickettsial, and Mycoplasmal infections. In Henry’s Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods– Sauders Elsevier 21-Ed 2007- pg 1002, 1003.
  3. Centers for Disease Control and Prevention, “Sexually Transmitted Diseases Treatment Guidelines 2010,” MMWR Recomm Rep, 2013, vol. 59(RR12):1-116.
  4. Bernard M. Karnath. Manifestations of Gonorrhea and Chlamydial In Hospital Physician May/June 2009. www.turner-white.com.
  5. Laborator Synevo. Referinţe specifice tehnologiei de lucru utilizate 2013. Ref Type: Catalog.
  6. Johnson RE, Newhall WJ, Papp JR, et al, “Screening Tests to Detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae,” MMWR Recomm Rep, 2002, 51(RR15):1-38.
  7. Specialty Laboratories. Chlamydia trachomatis & Neisseria gonorrhoeae for symptomatic and asymptomatic patients. specialtylabs.com. Ref Type: Internet Communication.
  8. Rebecca Rockett, Namraj Goire et al. Evaluation of the cobas 4800 CT/NG test for detecting Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae. In Sex Transm Infect 2010;86:470-
  9. Barbara Van Der Pol,a,b Oliver Liesenfeld, et al. Performance of the cobas CT/NG Test Compared to the Aptima AC2 and Viper CTQ/GCQ Assays for Detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae. In Journal of Clinical Microbiology, 2012, vol. 50, No.7, p. 2244-2249.
  10. Taylor SN, Liesenfeld O, et al. Evaluation of the Roche Cobas CT/NG test for detection of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae in male urine. In Sex Transm Dis. 2012, 39(7): 543-9.
< inapoi la lista

Pret 480.00 MDL