int(0)

Teste de laborator

Pachete de analize medicale

Planșa anatomică

Teste de la A la Z A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T U V W X Y Z
Teste Laborator
Product categories
Pachete analize Plansa anatomica
< inapoi la lista

Epstein-Barr-Virus (EBV) ADN in LCR

Pret 1540.00 MDL

Общая информация

Вирус Эпштейна-Барр

Этиология. Вирус герпеса человека 4 типа (ВГЧ-IV), или вирус Эпштейна-Барр, – лимфотропный вирус, его этиологическая роль известна при инфекционном мононуклеозе, лимфоме Беркитта, назофарингеальной карциноме, лимфопролиферативном синдроме, связанным с X-хромосомой, и синдроме хронической усталости. Это ДНК-геномный вирус рода Lymphocryptovirus подсемейства Gammaherpesvirinae семейства Herpesviridae, имеет 4 основных антигена: ранний антиген (early antigen — ЕА), капсидный антиген (viral capcide antigen – VCA), мембранный антиген (membrane antigen — MA); ядерный антиген (Epstain-Barr Nuclea antigen – EBNA). Каждый из них образуется в определённой последовательности и индуцирует синтез соответствующих антител.

Эпидемиология. Источник заражения – инфицированный человек (с манифестной или стёртой формой болезни, а также вирусоноситель). Первичная инфекция чаще возникает в детском или молодом возрасте. Пути передачи вируса: воздушно-капельный, контактно-бытовой, трансфузионный, половой, трансплацентарный. После заражения репликация вируса в организме человека и формирование иммунного ответа могут протекать бессимптомно, либо проявляться в виде незначительных признаков ОРВИ. В некоторых случаях, чаще при наличии в данный период значимого ослабления иммунной системы, у пациента может развиться картина инфекционного мононуклеоза. Около 90% взрослого населения мира заражены вирусом Эпштейна-Барр и после первичной инфекции остаются пожизненными носителями вируса.

Патогенез. Входными воротами при инфекционном мононуклеозе является слизистая оболочка ротовой полости и верхних дыхательных путей. Вирус Эпштейна-Барр проникает через интактные эпителиальные слои путем трансцитоза в нижележащую лимфоидную ткань миндалин, в частности В-лимфоциты. После инфицирования число пораженных клеток увеличивается посредством вирус-зависимой клеточной пролиферации. Инфицированные В-лимфоциты могут значительное время находиться в тонзиллярных криптах, что позволяет вирусу выделяться во внешнюю среду со слюной. С инфицированными клетками вирус распространяется по другим лимфоидным тканям и периферической крови. В инфицированных вирусом клетках возможно два вида размножения: литический, то есть приводящий к гибели, лизису клетки-хозяина, и латентный, когда число вирусных копий небольшое и клетка не разрушается. При острой или активной инфекции преобладает литическая репликация вируса. Вирус может длительно находиться в В-лимфоцитах и эпителиоцитах назофарингеальной области и слюнных желез. Кроме того, он способен инфицировать другие клетки: Т-лимфоциты, NK-клетки, макрофаги, нейтрофилы, эпителиоциты сосудов. В ядре клетки-хозяина ДНК вируса может встраиваться в геном, вызывая хромосомные нарушения. Активное размножение вируса может происходить в результате ослабления иммунологического контроля, а также стимуляции размножения клеток, инфицированных вирусом под действием ряда факторов: острой бактериальной или вирусной инфекции, вакцинации, стрессов и т.д.

Клинические проявления. Инфекционный мононуклеоз – острое антропонозное вирусное инфекционное заболевание, характеризующееся лихорадкой, поражением ротоглотки, лимфатических узлов, печени и селезёнки и специфическими изменениями гемограммы. Инкубационный период заболевания — 4-6 недель. В продромальный период инфекция проявляется болями в мышцах, утомляемостью, общим недомоганием. Затем к ним присоединяется лихорадка, боль в горле, увеличение лимфатических узлов, селезёнки и иногда печени. В некоторых случаях появляется сыпь на руках и туловище. Симптомы сохраняются 2-4 недели. У детей инфекция часто протекает бессимптомно. Возможно несколько вариантов исхода острого инфекционного процесса:

  1. Выздоровление.
  2. Бессимптомное вирусоносительство или латентная инфекция.
  3. Хроническая рецидивирующая инфекция:

а) хроническая активная инфекция (сохранение симптомов инфекционного мононуклеоза более 6 месяцев);

б) генерализованная форма (возможно поражение нервной системы (энцефалит, полинейропатии, менингит), других внутренних органов (миокардит, гломерулонефрит, лимфоцитарная интерстициальная пневмония, гепатит);

в) гемофагоцитарный синдром, ассоциированный с ВЭБ инфекцией;

г) стертые или атипичные формы (длительный субфебрилитет неясного генеза, клиника вторичного иммунодефицита — рецидивирующие бактериальные, грибковые, часто — микст-инфекции респираторного и желудочно-кишечного тракта, фурункулез и т.д.);

д) развитие онкологического (лимфопролиферативного) процесса (множественные поликлональные лимфомы, назофарингеальная карцинома, лейкоплакии языка и слизистых ротовой полости, рак желудка и кишечника и др.);

е) развитие аутоиммунных процессов (СКВ, ревматоидного артрита, синдрома Шегрена и др.);

ж) вирус Эпшейна-Барр может играть важную роль в возникновении синдрома хронической усталости.

Прогноз для больного с острой инфекцией, вызванной вирусом Эпштейна-Барр, зависит от наличия и степени выраженности иммунной дисфункции, генетической предрасположенности к ВЭБ-ассоциированным заболеваниям, а также от влияния внешних факторов (стресс, инфекции, операционные вмешательства, неблагоприятное воздействие окружающей среды), повреждающих иммунную систему.

У иммунокомпетентных пациентов инфицированные В-лимфоциты находятся под контролем Т-лимфоцитов, поэтому, в большинстве случаев, при реактивации инфекции протекание заболевания остается в субклинической форме. У пациентов со СПИДом клонирование непогибающих В-лифоцитов может вызывать развитие лимфомы.

Лабораторная диагностика основывается на определении серологических маркеров инфекции и выявлении методом ПЦР вируса в различных биологических жидкостях.

Гематологические изменения, напоминающие картину инфекционного мононуклеоза, могут наблюдаться и при цитомегаловирусной инфекции, токсоплазмозе, острых респираторных вирусных заболеваниях, ветряной оспе, кори, инфекционных гепатитах и других заболеваниях. Поэтому для дифференциальной диагностики целесообразно проведение ряда тестов. Специфическая серологическая диагностика инфекции основана на использовании комбинации тестов, выявляющих наличие IgG и IgM антител к различным белкам-антигенам вируса, что, в большинстве случаев, позволяет дифференцировать инфекцию и уточнить стадию патологического процесса.

Молекулярные методы диагностики

Выявление вируса Эпштейна-Барр методом ПЦР

Материал Правила подготовки пациента Транспортная среда, пробирка
Ликвор Ликвор для ПЦР -исследования Стерильный контейнер для транспортировки
Метод тестирования ПЦР количественный анализ
 

 

Показания к назначению
· Выявление и количественное определение ДНК вируса Эпштейна-Барр;

· оценка вирусной нагрузки для решения вопросов лечения и контроля за ее эффективностью;

· контроль персистенции и выделения вируса

Интерпретация результатов
Обнаружено Не обнаружено
· Инфицирование ЭБВ;

· бессимптомное носительство вируса;

· реактивация ЭБВ инфекции

· Отсутствие инфицирования;

· низкое количество ДНК вируса в данном материале, которое выходит за пределы

аналитической чувствительности анализатора

Informatii generale si recomandari

Virusul Epstein-Barr (EBV) este asociat cu un spectru larg de afectiuni benigne si maligne ce include: mononucleoza infectioasa, limfomul, sindromul limfoproliferativ posttransplant si carcinomul nazofaringian.

Determinarea genomului viral EBV-ADN este din ce in ce mai mult utilizata in laboratoarele clinice in diagnosticul si monitorizarea afectiunilor induse de aceasta infectie5.

Infectiile EBV sunt larg raspandite astfel ca pana la virsta de 35-40 ani 95% dintre persoanele  adulte au venit in contact cu acest virus. Multi copii dobandesc infectia in primii de viata, insa in majoritatea cazurilor aceasta este asimptomatica sau evolueaza ca o infectie usoara de tract respirator superior7. La adolescent si adultul tanar infectia EBV primara poate determina, in 35-50% din cazuri, mononucleoza infectioasa – o afectiune limfoproliferativa benigna caracterizata prin febra, astenie fizica, faringita si poliadenopatii.

Infectiile primare se caracterizeaza  prin viremii crescute care inregistreaza scaderi pana la valori nedetectabile pe masura ce sistemul imun recunoaste si controleaza infectia. Ca si alte virusuri herpetice, EBV poate sa ramana in organism intr-o stare dormanta ani de zile (infectie latenta). Reactivarile periodice sunt insotite de viremii tranzitorii. Unii pacienti dezvolta ulterior neoplazii asociate infectiei EBV iar acestia prezinta ca trasatura definitorie valori foarte ridicate ale viremiei. Astfel, determinarea cantitativa EBV-ADN nu detecteaza numai infectia activa ci constituie si un fi “marker tumoral” pentru anumite tipuri de procese maligne2;3;8.

Testul de detectie a genomului EBV (EBV-ADN) in sange poate fi util in diagnosticul mononucleozei infectioase in stadiu precoce precum si in situatiile in care markerii serologici nu ofera rezultate concludente.

Genomul EBV a fost depistat in sangele pacientilor atat in infectiile primare cat si in reactivari. Conform unui studiu, utilizarea metodei moleculare a crescut cu peste 16%  numarul cazurilor diagnosticate6.

Complicatiile neurologice in mononucleoza infectioasa au fost documentate pentru prima data in urma cu peste 70 ani. Incidenta exacta a acestora nu este cunoscuta, dar este estimata la 1-5% din cazuri. EBV produce afectiuni atat ale sistemului nervos central cat si periferic. Prezenta EBV-ADN in LCR a fost demonstrata astfel la pacienti cu meningita aseptica, encefalita, mielita si neuropatie (oftalmoplegie, plexopatie lombosacrata, neuropatie senzoriala sau autonoma)1.

Alaturi de diagnosticul complicatiilor neurologice ale infectiei primare, EBV-ADN in LCR constituie un marker non-invaziv pentru cazurile de limfom al sistemului nervos central asociate cu sindromul imunodeficientei dobandite SIDA (sensibilitate de 83-100% si specificitate >90% ca „marker tumoral”)4.

Pregatire pacient – nu este necesara5.

Specimen recoltata) sange venos; b) lichid cefalorahidian recoltat prin punctie lombara5.

Recipient de recoltare – a) vacutainer ce contine EDTA ca anticoagulant; b) recipient steril pentru LCR5.

Cantitate recoltata – a) cat permite vacuumul; b) minimum 2 mL5.

Prelucrare necesara dupa recoltare – a) proba nu va fi centrifugata5.

Cauze de respingere a probei – a) probe vechi, coagulate, hemolizate; folosirea heparinei ca anticoagulant5.

Stabilitate proba – probele de sange sau de LCR sunt stabile 3 zile  la 2-8°C5. Probele nu se congeleaza!

MetodaReal-time PCR Light-Cycler: reactie de polimerizare in lant cu detectie in timp real a produsului PCR  acumulat, prin masurarea fluorescentei emise5.

Valori de referinta – EBV-ADN nedetectabil5.

Limita de detectie – 1.8 UI/µL5.

Interpretarea rezultatelor

Obtinerea unui rezultat pozitiv in LCR sustine diagnosticul clinic de afectiune SNC cauzata de EBV7.

Limite si interferente

Un rezultat negativ in LCR nu elimina posibilitatea unei infectii SNC cauzata de EBV7.

La pacientii cu SIDA pot exista ocazional rezultate fals pozitive sau fals negative pentru EBV-ADN in LCR; in situatiile neconcludente se va recurge la biopsie cerebrala pentru a confirma sau infirma un limfom primar SNC4.

 

Bibliografie

1. Arshad Majid et al. Epstein–Barr virus myeloradiculitis and encephalomyeloradiculitis. In Brain, Vol. 125, No. 1, 159-165, January 1, 2002.

2. De David H. Persing, Thomas F. Smith, Fred C. Tenover. PCR Detection and Typing of Epstein-Barr Virus. In Diagnostic molecular microbiology. 1993. 344-355

3. Gulley ML, Tang W. Laboratory Assays for Epstein-Barr Virus-Related Disease. In J Molec Diagn, 2008; 10:279-292.

4. Guy Boivin. Diagnosis of herpesvirus Infection of the Central Nervous System. In Herpes 11. Supplement 2004; 2, 49-54.

5. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate. 2015. Ref Type: Catalog.

6. Luderer Rianne et al. Real Time Epstein-Barr Virus PCR for diagnosis of primary EBV infections and EB reactivation. In Molecular Diagnosis, 2005; 9 ( 4): 195-200.

7. Mayo Clinic/Mayo Medical LaboratoriesTest Catalogs and Guides. Epstein-Barr Virus (EBV) by Rapid PCR. www.mayomedicallaboratories.com. Ref Type: Internet Communication.

8. Ryan JL, Fan H, Swinnen LJ, Schichman SA, Raab-Traub N, Covington M, Elmore S, Gulley ML. Epstein- Barr Virus (EBV) DNA in plasma is not encapsidated in patients with EBV-related malignancies. In Diagn Mol Pathol. 2004;13:61–68.

< inapoi la lista

Pret 1540.00 MDL