Plansa anatomica

imunocitodiagnostic cin2+

1570 MDL
Trimite pe e-mail acest articol
Printeaza acest articol

Informatii generale si recomandari
Imunocitodiagnostic CIN2+ (CINtec​​®​ PLUS) este un test imunocitochimic dual de diagnostic predictiv utilizat pentru evaluarea calitativa a coexpresiei celulare a proteinelor p16INK4a si Ki67 pe material citologic cervico-vaginal. Acest test permite identificarea cu inalta sensibilitate (94%)1 si specificitate (97,5%)1 a riscului de progresie catre leziuni cervicale intraepiteliale de grad inalt (CIN2+)1,2.
Proteina p16INK4a este implicată în controlul ciclului celular, initiind un mecanism de blocare a diviziunii celulare prin incetinirea progresiei din faza G1 in faza S. Astfel, in mod normal proteina p16INK4a actioneaza ca un factor supresor tumoral, blocand multiplicarea necontrolata a celulelor infectate cu HPV. In infectiile HPV persistente, are loc sinteza oncoproteinelor virale E6 si E7, care inactiveaza genele supresoare tumorale p53 si RB conducand la instabilitatea genomica a celulelor epiteliale si la proliferarea necontrolata a acestora3.
Oncoproteina E7 inhiba functia proteinei retinoblastomului (pRB) si abilitatea acesteia de a lega factorul de transcriptie E2F, ceea ce conduce la acumularea (supraexpresia) proteinei p16INK4a care devine detectabila imunocitochimic. Supraexpresia p16INK4a marcheaza momentul critic al transformarii oncogenice a celulelor cu infectie HPV, si este utilizata ca biomarker pentru leziunile cervicale precanceroase şi canceroase4.

Proteina Ki67 este un marker de proliferare celulara si este exprimat in nucleul celulelor proliferative (e.g. celulele din stratul parabazal al epiteliului cervical normal). Asocierea in aceeasi celula a expresiei p16INK4a si Ki67 indica perturbarea ciclului celular ca marca directa a activitatii oncogenice a HPV si reprezinta un criteriu obiectiv pentru selectarea pacientelor cu risc crescut de leziuni cervicale de grad inalt in vederea evaluarii colposcopice.

Recomandarile de testare includ:
– pacientele cu rezultat citopatologic cervico-vaginal de tip non-HSIL;
– pacientele cu rezultat pozitiv la genotiparea HPV pentru tulpini cu risc inalt.

Algoritm pt testarea CIN2+
Fig. 1. Algoritm pentru testarea Imunocitodiagnostic CIN2+ (CINtec​​®​ PLUS).

Pregatire pacienta
– Cu 24-48 ore înainte de recoltarea probei trebuie sa fie evitate: raporturile sexuale, lavajul vaginal, alte tratamente intravaginale (geluri, creme, contraceptive, dezinfectante, lubrifianti) sau alte manevre intravaginale (tampoane intravaginale, explorare vaginala).
-Se recomanda recoltarea in afara perioadei menstruale, in perioada de mijloc a ciclului menstrual, iar in cazul infecţiilor, dupa tratarea acestora.
-In cazul procedurilor medico-chirurgicale, se recomanda recoltarea inainte de examinarea manuala, inainte sau la minim 24 ore postcolposcopie cu aplicatie de acid acetic, la 3 luni de la recoltari anterioare, iar in cazul electrorezectiilor, polipectomiilor ca si postpartum ar trebui să existe un interval de 1.5-3 luni.
Specimen recoltat
– Celule ale zonei exocervicale, endocervicale si de tranzitie dintre acestea (zona de transformare).
Recoltare
– Se efectueaza cu ajutorul periutei cervicale cu cap detasabil, in recipientele SurePath destinate recoltarii pentru examenul citopatologic cervico-vaginal Babes-Papanicolau in mediu lichid.
Stabilitate proba
– Termenul de pastrare a mediului lichid fara proba recoltata este de 36 luni de la data fabricatiei la temperatura camerei (15-30°C). Dupa recoltare, proba cu materialul celular se poate pastra 6 luni la 2-10°C sau 4 saptamani la temperatura camerei (15-30°C).
Cauze de respingere a probei
-Proba necorespunzatoare: flacon deteriorat, mediu de transport absent/insuficient, absenta din flacon a capatului de recoltare al periutei.
-Proba neetichetate, fisa incompleta fara datele clinice si de identificare complete ale pacientei.

 

Metoda
Procesarea pretestare imunocitochimica a materialul celular se realizeaza in sistem complet automatizat, similar preparatelor pentru examenul citopatologic cervico-vaginal Babes-Papanicolau in mediu lichid si cuprinde separarea detritusurilor, etalarea celularitatii epiteliale si procesarea pana la colorare.
Testarea Imunocitodiagnostic CIN2+ (CINtec​​®​ PLUS) se realizeaza in sistem complet automatizat, utilizand un kit cu solutii de diagnostic prediluate care permite detectia imunocitochimica simultana a doua proteine. Etapele de procesare includ demascarea antigenica, inhibarea activitatii peroxidazei endogene, incubarea cu cei doi anticorpi primari si rularea a doua sisteme de vizualizare a reactiilor imunocitochimice in doua culori diferite. Postprocesare, lamele cu materialul citologic testat sunt montate sub doua medii de montare. Evaluarea lamelor se realizeaza cu ajutorul unui microscop optic, independent de morfologia celulara.
Interpretarea rezultatelor
Testul Imunocitodiagnostic CIN2+ (CINtec​​®​ PLUS) este interpretat ca pozitiv atunci cand exista cel putin o celula care exprima ambele proteine simultan, p16INK4a si Ki67. Supraexpresia p16INK4a este indicata de reactia citoplasmatica pozitiva (culoare maron), iar supraexpresia Ki-67 este indicata de reactia imunocitochimica nucleara (culoare rosie). Dublul semnal imunocitochimic atesta dereglarea ciclului celular pe fondul unor modificari ale genomului celular si indica potentialul evolutiv catre o leziune de grad inalt.

 

Test CIN2+ pozitiv
Fig. 2. Test Imunocitodiagnostic CIN2+ (CINtec​​®​ PLUS) pozitiv.

Limite si interferente
– Nerespectarea indicatiilor referitoare la pregatirea pacientelor, la tehnica de recoltare si la conditiile de stabilitate a probelor poate influenta negativ cantitatea si calitatea materialului celular analizat.
– Absenta optimizarii contracolorarii cu hematoxilina nu permite interpretarea corecta a rezultatelor.
– Rezultatul testarii Imunocitodiagnostic CIN2+ (CINtec​​®​ PLUS) trebuie integrat in contextul prezentarii clinice.

 

Bibliografie
1. Ikenberg H, Bergeron C, Schmidt D, Griesser H, Alameda F, Angeloni C, Bogers J, Dachez R, Denton K, Hariri J, Keller T, von Knebel Doeberitz M, Neumann HH, Puig-Tintore LM, Sideri M, Rehm S, Ridder R; PALMS Study Group. Screening for Cervical Cancer Precursors With p16/Ki-67 Dual-Stained Cytology: Results of the PALMS Study. J Natl Cancer Inst. 2013;105(20):1550-1557); PUBMED: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24096620.

2. Petry KU, Schmidt D, Scherbring S, Luyten A, Reinecke-Lüthge A, Bergeron C, Kommoss F, Löning T, Ordi J, Regauer S, Ridder R. Triaging Pap cytology negative, HPV positive cervical cancer screening results with p16/Ki-67 Dual-stained cytology. Gynecol Oncol. 2011 Jun 1;121(3):505-9. doi: 10.1016/j.ygyno.2011.02.033. Epub 2011 Mar 21.
3. Tornesello ML, Buonaguro L, Giorgi-Rossi P, Buonaguro FM. Viral and Cellular Biomarkers in the Diagnosis of Cervical Intraepithelial Neoplasia and Cancer. Hindawi Publishing Corporation BioMed Research International, Volume 2013, Article ID 519619, 10 pages, http://dx.doi.org/10.1155/2013/519619

4. Tsutsui T, Kumakura S, Yamamoto A, Kanai H, Tamura Y, Kato T, Anpo M, Tahara H, Barrett JC. Association of p16INK4a and pRb inactivation with immortalization of human cells. Carcinogenesis vol.23 no.12 pp.2111–2117, 2002

Plansa anatomica
Abonează-te la Newsletter